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jozsh

新虫 (小有名气)

[求助] 组织和细胞中,膜蛋白,胞浆蛋白,核蛋白提取裂解液区别

组织和细胞中,膜蛋白,胞浆蛋白,核蛋白提取裂解液区别

有人说提取膜蛋白要加2M还是7M的尿素,但是具体要加多少呢????求配方啊!!!!!!!!!!核蛋白又怎么提取呢????
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月光薯片

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by huiniss at 2012-12-27 11:02:15
无意间发现这个,希望对楼主有用:取各组股四头肌样品2 g,置入20%匀浆液(250 mmol/L蔗糖,10 mmol/L碳酸氢钠,5 mmol/L叠氮钠),匀浆后离心(1200 g)10 min,留上清液,190000 g离心1 h,制备蔗糖梯度(25%、30 ...

请问,最后一部离心是取上清吗?为什么要用蔗糖和Tris悬浮?这个有点搞不清楚~谢谢~
5楼2013-11-14 15:32:22
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zx1984

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
核蛋白的提取,你可以找一下试剂盒,方便,效率也不错。
2楼2012-12-27 09:54:55
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huiniss

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不太好弄啊,楼主最好查询SCI相关文献中这些蛋白的提取方法。如有一篇SCI中提到:Nuclear protein was extracted from the pelleted cells using the EpiQuik Nuclear Extraction Kit according to the manufacturer's instructions.
3楼2012-12-27 10:56:48
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huiniss

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

无意间发现这个,希望对楼主有用:取各组股四头肌样品2 g,置入20%匀浆液(250 mmol/L蔗糖,10 mmol/L碳酸氢钠,5 mmol/L叠氮钠),匀浆后离心(1200 g)10 min,留上清液,190000 g离心1 h,制备蔗糖梯度(25%、30%、35%),150000 g离心2 h,细胞膜成分从25%蔗糖的上半层收集,细胞内膜成分为30%和35%蔗糖层交界处收集,以10 mmol/L碳酸氢钠,5 mmol/L叠氮钠溶液稀释各膜成分,190000 g离心1 h,以250 mmol/L蔗糖、50 mmol/L Tris (pH 7.4)溶液悬浮沉淀,所有过程在4℃进行。这样的话,是不是细胞膜就可以提取其蛋白质了?
4楼2012-12-27 11:02:15
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