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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞裂解提取细胞内的总蛋白，需要使用什么试剂盒，求推荐
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felanengel

新虫 (初入文坛)

[求助] 细胞裂解提取细胞内的总蛋白，需要使用什么试剂盒，求推荐 已有1人参与

各位大侠，我接下来的实验需要测定一下细胞因子导入肿瘤细胞前后的活性，所以导入后需要将肿瘤细胞裂解，提取总蛋白，再使用细胞因子ELISA KIT测定对应的活性，但是细胞裂解提取总蛋白这一步，实验室没有人做过，需要向各位前辈求助，使用什么试剂盒，什么方法，谢谢！
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1楼 2012-07-17 16:59:39
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
比较简单吧，注意加PMSF防止蛋白酶水解蛋白，你可以尝试用碧云天的蛋白裂解液，我用的这个牌子，还可以，如果经费充足，可以选好点的试剂，这一步不是很复杂
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2楼2012-07-17 19:38:50
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felanengel

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-17 19:38:50
比较简单吧，注意加PMSF防止蛋白酶水解蛋白，你可以尝试用碧云天的蛋白裂解液，我用的这个牌子，还可以，如果经费充足，可以选好点的试剂，这一步不是很复杂

好的，谢谢啦
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3楼2012-07-17 21:02:53
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felanengel

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-17 19:38:50
比较简单吧，注意加PMSF防止蛋白酶水解蛋白，你可以尝试用碧云天的蛋白裂解液，我用的这个牌子，还可以，如果经费充足，可以选好点的试剂，这一步不是很复杂

那请问一下，是用RIPA裂解液吗，强中弱哪个比较好，另外，必须加蛋白酶抑制剂吗，如果细胞里没有分解我需要测定的蛋白的酶，是不是不用
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4楼2012-07-18 09:51:33
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by felanengel at 2012-07-18 09:51:33
那请问一下，是用RIPA裂解液吗，强中弱哪个比较好，另外，必须加蛋白酶抑制剂吗，如果细胞里没有分解我需要测定的蛋白的酶，是不是不用...

这几种各有侧重点吧，不一样的蛋白，选取的裂解液也是不一样的，还有就是，你怎么知道细胞里没有分解你测定的蛋白的酶呢？我觉得PMSF最好是加的
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5楼2012-07-18 11:47:04
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boyuanbio

捐助贵宾 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币-5, 屏蔽内容, 违规存档, 警告 2012-07-19 09:06:26
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felanengel
6楼2012-07-18 11:55:22
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felanengel

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by boyuanbio at 2012-07-18 11:55:22
可以到这个网站上看看http://www.boyuanbio.com/agr/，有详细的说明！

thanks a lot
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7楼2012-07-18 19:02:36
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felanengel

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-18 11:47:04
这几种各有侧重点吧，不一样的蛋白，选取的裂解液也是不一样的，还有就是，你怎么知道细胞里没有分解你测定的蛋白的酶呢？我觉得PMSF最好是加的...

嗯，好的，谢谢，碧云天有个强中弱套装，而Thermo公司的每种都快一千了，老师说可以用进口的，我再咨询一下
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8楼2012-07-18 19:03:50
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

有钱的话，最好还是进口的，但我个人支持国货
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9楼2012-07-18 19:09:11
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晚香玉

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
生物试剂要求比较精确一点的话一定要用进口的。。。
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10楼2012-07-18 20:38:05
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