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细胞裂解缓冲液的配制？求助各位大虾
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Sample Text 细胞裂解缓冲液 10mmol/l Tris-cl（PH8.0） 1mmol/l EDTA（PH8.0） 0.1%（m/V）SDS 这是分子克隆实验指南里面的一种缓冲液配方，用来提取动物基因组DNA，求教各位大虾，这是分开单独配还是混在一起配？分开单独配的话，那各自的量又是加多少？混一起配的话那具体是怎么配了？第一次做实验，实在搞不明白，请各位高手指教一下，不胜感激。。。。。。。。 |
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 分子生物学相关 | 我的实验 |
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atlanticwi
金虫 (正式写手)
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+4, 鼓励发帖交流问题。 2012-04-26 18:10:05
晏育伟: 金币+2, ★★★很有帮助, 很详细，谢啦。我按你说的方法去配。 2012-04-27 10:20:36
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晏育伟: 金币+2, ★★★很有帮助, 很详细，谢啦。我按你说的方法去配。 2012-04-27 10:20:36
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嗯........... 是这样的，肯定需要混在一起配制，若你分开单独配制，必需先配成母液后混合，而短期使用的话，没有必要配成母液。 假设你需要1L这样的裂解液，在800mL的蒸馏水中溶解浓度为10mmol/L（具体添加多少g，你要自己算，我直接说只能是教懒人咯）的Tris，用市售盐酸调pH到8.0后，添加EDTA（或EDTA.2Na也可，没有区别），量同样你自己算，强烈搅拌完全溶解后，添加SDS至文中要求浓度，慢速搅拌至溶解（强烈搅拌会产生大量泡沫） 室温放置就可以了 祝实验顺利，若有说错请高手指点  |
2楼2012-04-26 16:46:36
yjchsh
铁杆木虫 (正式写手)
Dr.
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西瓜: 金币+3, Thanks for your help~~~ 2012-04-29 17:38:03
西瓜: 金币+3, Thanks for your help~~~ 2012-04-29 17:38:03
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I bet you are a beginner from the requestion you asked. I think you prepare stock solutions will be more convenient. You could make fresh lysis buffer every time. I bet you do not need too much lysis buffer each time. To make stocks: 1 M Tris (concentrated HCl adjust pH to 8.0). (weigh 12.1 g Tris and dissolve in 80 ml dH2O, add HCl to pH8.0, and then adjust volume to 100 ml with dH2O) 500 mM EDTA (Add 5 M NaOH adjust pH to pH8.0 to dissovle) (EDTA-Na is not soluble very well in neutral pH, so add 5M NaOH to dissovle first, then adjust pH to 8.0) 10% SDS (dissolve 5 g SDS in 50 ml dH2O) These stocks could be kept at room temperature for months. Use stocks above to make your fresh lysis buffer. Good luck with your experiments. |
3楼2012-04-29 11:22:52
4楼2012-05-03 09:54:59
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