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felanengel

新虫 (初入文坛)

[求助] 细胞裂解提取细胞内的总蛋白,需要使用什么试剂盒,求推荐 已有1人参与

各位大侠,我接下来的实验需要测定一下细胞因子导入肿瘤细胞前后的活性,所以导入后需要将肿瘤细胞裂解,提取总蛋白,再使用细胞因子ELISA KIT测定对应的活性,但是细胞裂解提取总蛋白这一步,实验室没有人做过,需要向各位前辈求助,使用什么试剂盒,什么方法,谢谢!
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jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
比较简单吧,注意加PMSF防止蛋白酶水解蛋白,你可以尝试用碧云天的蛋白裂解液,我用的这个牌子,还可以,如果经费充足,可以选好点的试剂,这一步不是很复杂
2楼2012-07-17 19:38:50
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felanengel

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-17 19:38:50
比较简单吧,注意加PMSF防止蛋白酶水解蛋白,你可以尝试用碧云天的蛋白裂解液,我用的这个牌子,还可以,如果经费充足,可以选好点的试剂,这一步不是很复杂

好的,谢谢啦
3楼2012-07-17 21:02:53
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felanengel

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-17 19:38:50
比较简单吧,注意加PMSF防止蛋白酶水解蛋白,你可以尝试用碧云天的蛋白裂解液,我用的这个牌子,还可以,如果经费充足,可以选好点的试剂,这一步不是很复杂

那请问一下,是用RIPA裂解液吗,强中弱哪个比较好,另外,必须加蛋白酶抑制剂吗,如果细胞里没有分解我需要测定的蛋白的酶,是不是不用
4楼2012-07-18 09:51:33
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jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by felanengel at 2012-07-18 09:51:33
那请问一下,是用RIPA裂解液吗,强中弱哪个比较好,另外,必须加蛋白酶抑制剂吗,如果细胞里没有分解我需要测定的蛋白的酶,是不是不用...

这几种各有侧重点吧,不一样的蛋白,选取的裂解液也是不一样的,还有就是,你怎么知道细胞里没有分解你测定的蛋白的酶呢?我觉得PMSF最好是加的
5楼2012-07-18 11:47:04
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boyuanbio

捐助贵宾 (初入文坛)

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
silicare: 金币-5, 屏蔽内容, 违规存档, 警告 2012-07-19 09:06:26
本帖内容被屏蔽

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6楼2012-07-18 11:55:22
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felanengel

新虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by boyuanbio at 2012-07-18 11:55:22
可以到这个网站上看看http://www.boyuanbio.com/agr/,有详细的说明!

thanks a lot
7楼2012-07-18 19:02:36
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felanengel

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-18 11:47:04
这几种各有侧重点吧,不一样的蛋白,选取的裂解液也是不一样的,还有就是,你怎么知道细胞里没有分解你测定的蛋白的酶呢?我觉得PMSF最好是加的...

嗯,好的,谢谢,碧云天有个强中弱套装,而Thermo公司的每种都快一千了,老师说可以用进口的,我再咨询一下
8楼2012-07-18 19:03:50
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jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

有钱的话,最好还是进口的,但我个人支持国货
9楼2012-07-18 19:09:11
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晚香玉

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
生物试剂要求比较精确一点的话一定要用进口的。。。
10楼2012-07-18 20:38:05
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