最近在做铜绿假单胞菌的oprD基因的分析，扩增之后跑电泳出现了目的条带，但是总是会出现其他的条带，少的有一条，多的有好几条，改了几次退火温度也不行，用降落PCR做65-55℃也不行，反而杂带更多了，图如下，请教各位大侠该怎么办呢，要换引物吗？
1、2图最左侧为Marker，从下到上为2000,1000,750,500,250,200,100bp。目的基因为1332bp，往右依次是PAO1，ATCC27853两个质控菌株，然后待测的菌株。总是出现杂带。
3图为不同的退火温度，59度。60度及62度。
参数为 98℃ 5min
95℃ 40S
58℃ 40s 30个循环
72℃ 90s
72℃ 10min
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