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hecuie1118

铁虫 (初入文坛)

[求助] PCR电泳总是出现杂带，该怎么处理？

最近在做铜绿假单胞菌的oprD基因的分析，扩增之后跑电泳出现了目的条带，但是总是会出现其他的条带，少的有一条，多的有好几条，改了几次退火温度也不行，用降落PCR做65-55℃也不行，反而杂带更多了，图如下，请教各位大侠该怎么办呢，要换引物吗？
1、2图最左侧为Marker，从下到上为2000,1000,750,500,250,200,100bp。目的基因为1332bp，往右依次是PAO1，ATCC27853两个质控菌株，然后待测的菌株。总是出现杂带。
3图为不同的退火温度，59度。60度及62度。
参数为   98℃   5min
             95℃    40S
             58℃    40s        30个循环
             72℃    90s
             72℃    10min

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1楼 2013-05-07 18:46:39
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刘仁坤2013

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-08 11:43:58
从图上可以看出，你电泳时电压，我个人认为偏大，还有就是你用的PCR反应液中Taq酶的浓度是不是偏大啊，还有就是你用的模板是什么啊，这些我觉得都有影响。
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2楼2013-07-08 09:35:19
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llm151789

新虫 (初入文坛)
大神，我想问下ATCC27853有抗性不？非常感谢？

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3楼2018-02-01 23:27:59
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