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hecuie1118

铁虫 (初入文坛)

[求助] PCR电泳总是出现杂带,该怎么处理?

最近在做铜绿假单胞菌的oprD基因的分析,扩增之后跑电泳出现了目的条带,但是总是会出现其他的条带,少的有一条,多的有好几条,改了几次退火温度也不行,用降落PCR做65-55℃也不行,反而杂带更多了,图如下,请教各位大侠该怎么办呢,要换引物吗?
1、2图最左侧为Marker,从下到上为2000,1000,750,500,250,200,100bp。目的基因为1332bp,往右依次是PAO1,ATCC27853两个质控菌株,然后待测的菌株。总是出现杂带。
3图为不同的退火温度,59度。60度及62度。
参数为   98℃   5min
             95℃    40S
             58℃    40s        30个循环
             72℃    90s
             72℃    10min

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刘仁坤2013

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-08 11:43:58
从图上可以看出,你电泳时电压,我个人认为偏大,还有就是你用的PCR反应液中Taq酶的浓度是不是偏大啊,还有就是你用的模板是什么啊,这些我觉得都有影响。
2楼2013-07-08 09:35:19
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llm151789

新虫 (初入文坛)

大神,我想问下ATCC27853有抗性不?非常感谢?

发自小木虫Android客户端
3楼2018-02-01 23:27:59
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