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zjhn

铁虫 (小有名气)

[求助] 7kb的片段用PCR能P得出来么?

7kb的片段用PCR能P得出来么?还有其他方法么?
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zjhn

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Haibara_Ai at 2013-01-28 22:19:21
可以 做点突变的时候 经常PCR 7K的质粒。

请问你用的什么酶?pcr程序是什么样的?
6楼2013-01-29 09:21:08
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普通回帖

mondy1981

新虫 (小有名气)

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zjhn: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-29 09:15:39
可以用Roche long template pcr kit or 分段p,然后连起来
2楼2013-01-28 20:31:24
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zjhn: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-29 09:15:49
可以 做点突变的时候 经常PCR 7K的质粒。
3楼2013-01-28 22:19:21
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WilliamHJ

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zjhn: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-29 09:15:55
理论上是可以的,条件严格一点,用的酶好一点的话就行,现在全质粒pcr已经比较成熟了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
学习中
4楼2013-01-28 22:31:34
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gl1986825

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zjhn: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-29 09:16:01
可以,最好用Prime Star这种高保真酶。一般没问题的
5楼2013-01-28 22:43:35
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

现在一直用phusion 以前也用过pfu ultraII
没有特别注意的地方。 20-25个循环后,纯化,dpnI切两小时,转化。
7楼2013-01-29 11:40:30
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alicelchf

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
也是phusion,毫无问题,呵呵,楼主控制一下浓度 应该是没有问题P出来的
修身、齐家、治国、平天下
8楼2013-01-29 13:04:09
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植物园园长

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用天根的Fast Hifi快速高保真酶可以的~
在路上~~Marketing!
9楼2013-01-31 09:31:55
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用phusion等适合长片段的酶应该是没问题的。
如果有困难,可以分段扩增。
10楼2013-01-31 10:24:17
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