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sevenlalala金虫 (小有名气)
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[求助]
求助，关于搭桥PCR
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| 最近在做一个3.5kb片段的扩增，一直扩不出来，就做了搭桥PCR，先是分成两个1.7kb片段，但是连不上，后来又换了中间的两条搭桥引物，变成2kb和1.5kb。无论是两个片段和引物一起PCR，还是先片段搭桥5个循环再加引物PCR都试过，还用了touchdown，但是只能得到一条不到1kb和一条大约1.6kb的片段，完全没有3+kb的痕迹，有哪位高人能指点一下么 |
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