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wyysunshine木虫 (知名作家)
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降落PCR求助！ 已有3人参与
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如题，PCR程序现为 94℃ 3 min 94℃ 1 min，58℃ 1 min，72℃ 1 min 30 s，3个循环； 94℃ 1 min，55℃ 1 min，72℃ 1 min 30 s，3个循环； 94℃ 1 min，52℃ 1 min，72℃ 1 min 30 s，25个循环； 72℃ 20 min。 跑出来在900 bp左右有一条较亮的带，但有较多杂带，想把这条最亮的跑出来看看是什么，请教该肿么调节程序呢？ 之前没跑过降落PCR  未命名.jpg |
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2楼2014-03-25 12:00:44
blackrose8089
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你这个touchdown太温柔了，达不到touchdown的分辨效果。 从75oC开始，一个cycle降1oC，降到你需要的最理想的温度，再P你需要的cycles。 另外，touch这个东西，只能叫锦上添花，你要是能看见主带，还有杂带，可以用这个优化， 你要是主带都没看见，只有杂带，估计用了它也无济于事 问题是你的产物大小，是准确计算的么？ 例如有没有isoform的问题，etc |
5楼2014-03-25 16:21:53
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