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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 降落PCR求助！
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wyysunshine

木虫 (知名作家)

[求助] 降落PCR求助！ 已有3人参与

如题，PCR程序现为
94℃ 3 min
94℃ 1 min，58℃ 1 min，72℃ 1 min 30 s，3个循环；
94℃ 1 min，55℃ 1 min，72℃ 1 min 30 s，3个循环；
94℃ 1 min，52℃ 1 min，72℃ 1 min 30 s，25个循环；
72℃ 20 min。
跑出来在900 bp左右有一条较亮的带，但有较多杂带，想把这条最亮的跑出来看看是什么，请教该肿么调节程序呢？
之前没跑过降落PCR

降落PCR求助！
未命名.jpg
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顺其自然~~
1楼 2014-03-25 11:07:32
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biology-boy

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wyysunshine: 金币+5, ★有帮助, 谢谢，正在调温度中。。。 2014-03-25 13:47:14
本帖内容被屏蔽
2楼2014-03-25 12:00:44
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wyysunshine: 金币+5, ★有帮助, 正有这个打算呢·· 2014-03-25 14:22:26
直接切胶回收测下序可以吗，楼主？
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jiayoubashaonian
3楼2014-03-25 14:05:31
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wyysunshine

木虫 (知名作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by blackrose8089 at 2014-03-25 14:05:31
直接切胶回收测下序可以吗，楼主？

原本这个引物跑出来应该是1.5kb左右的，但我从一开始跑就是900的样子，不晓得这是咋回事，但我准备把那条很亮的切了测序看看是神马，如果合适的话再重新根据测序结果设计引物，专门跑这条。。。
赞一下 回复此楼
顺其自然~~
4楼2014-03-25 14:25:34
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wyysunshine: 金币+10, ★★★很有帮助, 表示有点不懂···正在调试中 2014-03-26 15:51:31
你这个touchdown太温柔了，达不到touchdown的分辨效果。
从75oC开始，一个cycle降1oC，降到你需要的最理想的温度，再P你需要的cycles。
另外，touch这个东西，只能叫锦上添花，你要是能看见主带，还有杂带，可以用这个优化，
你要是主带都没看见，只有杂带，估计用了它也无济于事
问题是你的产物大小，是准确计算的么？
例如有没有isoform的问题，etc
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2014-03-25 16:21:53
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