应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Touch Down PCR
181/2返回列表12下一页
查看: 3545  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

摩羯的心

铁虫 (小有名气)

[求助] Touch Down PCR 已有6人参与

各位亲，谁做过Touch Down PCR 啊？我用做普通PCR的体系，做普通PCR，能做出好多杂带，但是用Touch Down PCR，却一条带都没有，我用的程序是，高于TM值10的温度开始每个循环降低一度，到TM-5，最低退火温度的时候，再做20个循环，这样就相当于总共做了35个循环，最后再72度延伸10分钟，但是却一条条带都没有，哪位亲，帮忙分析一下
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-12-24 14:13:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

hoajie

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-24 21:35:29
我做过touch down，不过跟你的不一样哎，不知道是不是pcr仪不一样。我们实验室的pcr仪是8列的，做touchdown时用8个样品，每一列各一个样品，从A到H，温度逐渐降低。你只要输入最大温度和最低温度，就行了。效果还好啊，高温时扩出来了，低温时有非特异性条带。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-12-24 18:07:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

woshishui916

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-24 21:35:40
能出来的
1、看看扩增片段的GC含量是否偏高；
2、如果不高，做TD-PCR的时候，可以考虑三个温度就可以了。不用每个循环降温，容易出弥散；
3、有问题联系
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-12-24 18:12:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

woshishui916

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by hoajie at 2013-12-24 18:07:12
我做过touch down，不过跟你的不一样哎，不知道是不是pcr仪不一样。我们实验室的pcr仪是8列的，做touchdown时用8个样品，每一列各一个样品，从A到H，温度逐渐降低。你只要输入最大温度和最低温度，就行了。效果还好 ...

你说的是梯度PCR，不是TD-PCR
赞一下 回复此楼
4楼2013-12-24 18:12:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

overhalfmoon

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-24 21:36:08
我一般不会每个循环降低一度，我都是每循环将0.3度，不需要降到TM-5度，这样特异性会非常差

另外P不出条带请找阳性对照试试看，看看是不是酶、模板等的问题
赞一下 回复此楼
5楼2013-12-24 21:05:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

摩羯的心

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hoajie at 2013-12-24 18:07:12
我做过touch down，不过跟你的不一样哎，不知道是不是pcr仪不一样。我们实验室的pcr仪是8列的，做touchdown时用8个样品，每一列各一个样品，从A到H，温度逐渐降低。你只要输入最大温度和最低温度，就行了。效果还好 ...

亲 你说的这个是梯度PCR吧
赞一下 回复此楼
6楼2013-12-25 16:05:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

摩羯的心

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by woshishui916 at 2013-12-24 18:12:37
能出来的
1、看看扩增片段的GC含量是否偏高；
2、如果不高，做TD-PCR的时候，可以考虑三个温度就可以了。不用每个循环降温，容易出弥散；
3、有问题联系

请问体系里各种试剂是怎么加呢  跟做普通PCR是一样的吗
赞一下 回复此楼
7楼2013-12-25 16:06:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

摩羯的心

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by overhalfmoon at 2013-12-24 21:05:23
我一般不会每个循环降低一度，我都是每循环将0.3度，不需要降到TM-5度，这样特异性会非常差

另外P不出条带请找阳性对照试试看，看看是不是酶、模板等的问题

阳性对照是不加模板或者是酶吗
赞一下 回复此楼
8楼2013-12-25 16:07:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

woshishui916

木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 摩羯的心 at 2013-12-25 16:06:34
请问体系里各种试剂是怎么加呢  跟做普通PCR是一样的吗...

是的
不过加了点保护剂
赞一下 回复此楼
9楼2013-12-25 16:28:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

海豚湾小鱼

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-01-29 16:19:03
建议做完一次Touch down后，再做一次二次pcr。
赞一下 回复此楼
10楼2013-12-26 09:29:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 摩羯的心 的主题更新
181/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 厉娜 +3 张丹枫1991 2026-11-09 5/250 2026-11-09 16:53 by 张丹枫1991
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 12/600 2026-11-09 13:26 by Equinoxhua
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 15/750 2026-11-09 13:19 by Equinoxhua
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 14/700 2026-11-09 11:52 by GwrQVVR6Oenx
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 15/750 2026-11-09 11:41 by GwrQVVR6Oenx
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 10/500 2026-11-09 08:00 by IhnEQauGmT3K
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 12/600 2026-11-09 06:32 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-09 00:14 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-08 23:01 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 9/450 2026-11-08 22:46 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 延安大学回应“副教授留绝笔信”：确已离世，正核实举报内容 +3 yexuqing 2026-11-04 5/250 2026-11-07 13:22 by 苏东坡二世
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:04 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭