24小时热门版块排行榜    

查看: 3326  |  回复: 17
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

摩羯的心

铁虫 (小有名气)

[求助] Touch Down PCR 已有6人参与

各位亲,谁做过Touch Down PCR 啊?我用做普通PCR的体系,做普通PCR,能做出好多杂带,但是用Touch Down PCR,却一条带都没有,我用的程序是,高于TM值10的温度开始每个循环降低一度,到TM-5,最低退火温度的时候,再做20个循环,这样就相当于总共做了35个循环,最后再72度延伸10分钟,但是却一条条带都没有,哪位亲,帮忙分析一下
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

woshishui916

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-24 21:35:40
能出来的
1、看看扩增片段的GC含量是否偏高;
2、如果不高,做TD-PCR的时候,可以考虑三个温度就可以了。不用每个循环降温,容易出弥散;
3、有问题联系
3楼2013-12-24 18:12:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

hoajie

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-24 21:35:29
我做过touch down,不过跟你的不一样哎,不知道是不是pcr仪不一样。我们实验室的pcr仪是8列的,做touchdown时用8个样品,每一列各一个样品,从A到H,温度逐渐降低。你只要输入最大温度和最低温度,就行了。效果还好啊,高温时扩出来了,低温时有非特异性条带。
2楼2013-12-24 18:07:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

woshishui916

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by hoajie at 2013-12-24 18:07:12
我做过touch down,不过跟你的不一样哎,不知道是不是pcr仪不一样。我们实验室的pcr仪是8列的,做touchdown时用8个样品,每一列各一个样品,从A到H,温度逐渐降低。你只要输入最大温度和最低温度,就行了。效果还好 ...

你说的是梯度PCR,不是TD-PCR
4楼2013-12-24 18:12:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

overhalfmoon

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-24 21:36:08
我一般不会每个循环降低一度,我都是每循环将0.3度,不需要降到TM-5度,这样特异性会非常差

另外P不出条带请找阳性对照试试看,看看是不是酶、模板等的问题
5楼2013-12-24 21:05:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +13 kkkl_v 2026-08-19 13/650 2026-08-19 22:37 by 宝贝虫子
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +12 基诺咪客 2026-08-17 16/800 2026-08-19 22:04 by kk 的小木虫
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +10 yuleib84 2026-08-18 11/550 2026-08-19 07:30 by 羽毛枫f
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
请填处理意见