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我是传奇456金虫 (正式写手)
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[求助]
求助在载体构建过程中，信号肽与GFP的引物设计、启动子切除以及读码框的问题 已有1人参与
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RT，GFP载体已经构建好，现在想引入能够定位亚细胞器的信号肽，特来求助，有如下几个问题： 1.结构方面，信号肽肯定是位于GFP之前，那么，信号肽与GFP是否需要分成两段分别导入载体？还是需要将信号肽与GFP融合成一段后再导入？如果是两段的话，信号肽与GFP之间能否有间隔？ 2.引物设计方面，信号肽的下游引物所设计的酶切位点，是否要与GFP的上游引物酶切位点保持一样？ 3.关于启动子，我所导入的信号肽并没有ATG这个序列，是否能成功转录？而GFP上自带的ATG启动子是否需要切除掉？不切除的话是否有影响？ 4.ORF，一段ORF是否就是从第一个启动子到第一个终止子这一段所表达的内容？如果此ORF中间部分含有启动子是否影响？ 盼大神解惑！谢谢！ |
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