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关于重叠PCR的问题~
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| 最近在做重叠PCR，要把一个基因的两个外显子连起来，选用的是Pfu扩增以获得这两个外显子片段，但是PCR结果是一点条带也没有，引物二聚体很亮，P了两次都这样；后来改用Ex Taq，其他都不变，PCR得到了很明显的目的条带，说明我的引物是没有问题的。请问我下一步应该怎么办呢？实验室有人建议我将以上片段回收，连T载后再用Pfu扩增，这种方法好不？再或者有没有更好的方法~菜鸟一枚，跪求指点！ |
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