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jza63

铁虫 (初入文坛)

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[求助] 融合PCR详细步骤已有3人参与

请问怎么做融合PCR（重叠延伸PCR），请列出详细步骤，万分感谢

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1楼2014-03-01 21:20:16

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shiyiyaya

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-03-02 15:46:04
jza63: 金币+10 2014-03-14 16:06:39

好，来相助一把。
在重叠的一段设计一对完全互补的引物（P1-Reverse和P2-Forward）。
1. 使用引物P1-Forward，P1-Reverse扩增片段Segment1；使用引物P2-Forward，P2-Reverse扩增片段Segment2.
2. 取一些第一轮PCR产物（5ul/25ul即可），重新加入Taq酶和dNTPs，buffer等，延伸一轮，15min左右。
3. 加入P1-Forward和P2-Reverse，进行第二轮PCR。
4.产物回收。
应该可以，具体细节根据你的引物和片段来定。

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2楼2014-03-01 21:27:47

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jza63

铁虫 (初入文坛)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by shiyiyaya at 2014-03-01 21:27:47
好，来相助一把。
在重叠的一段设计一对完全互补的引物（P1-Reverse和P2-Forward）。
1. 使用引物P1-Forward，P1-Reverse扩增片段Segment1；使用引物P2-Forward，P2-Reverse扩增片段Segment2.
2. 取一些第一轮PC ...

那么对引物有啥要求？原引物能用么

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3楼2014-03-02 20:01:57

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