应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 融合PCR详细步骤
91/1返回列表
查看: 13487  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

jza63

铁虫 (初入文坛)

[求助] 融合PCR详细步骤 已有3人参与

请问怎么做融合PCR（重叠延伸PCR），请列出详细步骤，万分感谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-03-01 21:20:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shiyiyaya

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-03-02 15:46:04
jza63: 金币+10 2014-03-14 16:06:39
好，来相助一把。
在重叠的一段设计一对完全互补的引物（P1-Reverse和P2-Forward）。
1. 使用引物P1-Forward，P1-Reverse扩增片段Segment1；使用引物P2-Forward，P2-Reverse扩增片段Segment2.
2. 取一些第一轮PCR产物（5ul/25ul即可），重新加入Taq酶和dNTPs，buffer等，延伸一轮，15min左右。
3. 加入P1-Forward和P2-Reverse，进行第二轮PCR。
4.产物回收。
应该可以，具体细节根据你的引物和片段来定。
赞一下(3人) 回复此楼
2楼2014-03-01 21:27:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jza63

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shiyiyaya at 2014-03-01 21:27:47
好，来相助一把。
在重叠的一段设计一对完全互补的引物（P1-Reverse和P2-Forward）。
1. 使用引物P1-Forward，P1-Reverse扩增片段Segment1；使用引物P2-Forward，P2-Reverse扩增片段Segment2.
2. 取一些第一轮PC ...

那么对引物有啥要求？原引物能用么
赞一下 回复此楼
3楼2014-03-02 20:01:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-03-03 08:29:02
就是搭桥PCR啊。设计前片段的反向引物跟后片段正向引物有二十多bp重复。用引物分别扩增片段，然后两片段等mol混合用前片段的正向引物和后片段反向引物扩增。
赞一下(1人) 回复此楼
hehe
4楼2014-03-02 20:43:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

forrestgump

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我严重统一2楼和3楼的，谢谢大家！
赞一下 回复此楼
5楼2014-03-02 23:25:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

兰舍难分

新虫 (初入文坛)
我想问一下，两段间重复片段如果有700bp，能做出来吗？
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2015-01-19 13:17:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 兰舍难分 at 2015-01-19 13:17:56
我想问一下，两段间重复片段如果有700bp，能做出来吗？

我的片段重复了200多bp，能行吗?同问
赞一下 回复此楼
7楼2015-11-08 22:09:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

叶建宏

新虫 (初入文坛)
请问重复序列太多可以么？
赞一下 回复此楼
8楼2016-03-07 18:47:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zaty95

木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 叶建宏 at 2016-03-07 18:47:12
请问重复序列太多可以么？

20-25BP
回复此楼
越努力，越幸运
9楼2019-09-27 15:52:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jza63 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 清华大学 材料与化工 353分求调剂 +3 awaystay 2026-03-02 4/200 2026-03-02 16:35 by chuocheng
[考研] 化工京区271求调剂 +4 11ing 2026-03-02 4/200 2026-03-02 15:47 by 杨杨杨紫
[考研] 303求调剂 +5 今夏不夏 2026-03-01 5/250 2026-03-02 15:01 by 向上的胖东
[考研] 化工专硕348，一志愿985求调剂 +6 弗格个 2026-02-28 9/450 2026-03-02 14:09 by liyongv
[考研] 282求调剂 +4 2103240126 2026-03-02 5/250 2026-03-02 13:45 by littlehu66
[考研] 338求调剂 +3 18162027187 2026-03-02 3/150 2026-03-02 13:12 by houyaoxu
[考研] 291 求调剂 +3 化工2026届毕业� 2026-03-02 3/150 2026-03-02 12:55 by houyaoxu
[考研] 272求调剂 +7 材紫有化 2026-02-28 7/350 2026-03-02 12:48 by 无际的草原
[考研] 26考研报考西工大材料308分求调剂 +4 weizhong123 2026-03-01 4/200 2026-03-02 12:46 by 无际的草原
[基金申请] 成果系统访问量大，请15分钟后再尝试。由此给您造成的不便，敬请谅解。 +5 xhuama 2026-03-02 5/250 2026-03-02 12:34 by stidwellNK
[考研] 材料工程274求调剂 +4 Lilithan 2026-03-01 4/200 2026-03-02 12:06 by yuchj
[考研] 276求调剂 +4 路lyh123 2026-02-28 5/250 2026-03-02 11:20 by yuchj
[考研] 274求调剂 +3 cgyzqwn 2026-03-01 7/350 2026-03-02 10:38 by lature00
[考研] 0856材料求调剂 +4 麻辣鱿鱼 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:51 by caszguilin
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[考研] 295复试调剂 +3 简木ChuFront 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:27 by zzxw520th
[考研] 寻找调剂 +4 LYidhsjabdj 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:56 by sunny81
[论文投稿] 求助coordination chemistry reviews 的写作模板 10+3 ljplijiapeng 2026-02-27 4/200 2026-03-01 09:07 by babero
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭