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融合PCR详细步骤已有3人参与
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| 请问怎么做融合PCR（重叠延伸PCR），请列出详细步骤，万分感谢 |
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forrestgump
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5楼2014-03-02 23:25:20
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-03-02 15:46:04
jza63: 金币+10 2014-03-14 16:06:39
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jza63: 金币+10 2014-03-14 16:06:39
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好，来相助一把。 在重叠的一段设计一对完全互补的引物（P1-Reverse和P2-Forward）。 1. 使用引物P1-Forward，P1-Reverse扩增片段Segment1；使用引物P2-Forward，P2-Reverse扩增片段Segment2. 2. 取一些第一轮PCR产物（5ul/25ul即可），重新加入Taq酶和dNTPs，buffer等，延伸一轮，15min左右。 3. 加入P1-Forward和P2-Reverse，进行第二轮PCR。 4.产物回收。 应该可以，具体细节根据你的引物和片段来定。 |
2楼2014-03-01 21:27:47
3楼2014-03-02 20:01:57
lvbobo823
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4楼2014-03-02 20:43:28