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zjhn

铁虫 (小有名气)

[求助] 7kb的片段用PCR能P得出来么？

7kb的片段用PCR能P得出来么？还有其他方法么？
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1楼 2013-01-28 17:56:11
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zjhn

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Haibara_Ai at 2013-01-28 22:19:21
可以 做点突变的时候 经常PCR 7K的质粒。

请问你用的什么酶？pcr程序是什么样的？
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6楼2013-01-29 09:21:08
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mondy1981

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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zjhn: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-29 09:15:39
可以用Roche long template pcr kit or 分段p，然后连起来
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2楼2013-01-28 20:31:24
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zjhn: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-29 09:15:49
可以 做点突变的时候 经常PCR 7K的质粒。
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3楼2013-01-28 22:19:21
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WilliamHJ

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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zjhn: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-29 09:15:55
理论上是可以的，条件严格一点，用的酶好一点的话就行，现在全质粒pcr已经比较成熟了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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学习中
4楼2013-01-28 22:31:34
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gl1986825

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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zjhn: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-29 09:16:01
可以，最好用Prime Star这种高保真酶。一般没问题的
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5楼2013-01-28 22:43:35
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)
现在一直用phusion 以前也用过pfu ultraII
没有特别注意的地方。 20-25个循环后，纯化，dpnI切两小时，转化。
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7楼2013-01-29 11:40:30
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alicelchf

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
也是phusion，毫无问题，呵呵，楼主控制一下浓度 应该是没有问题P出来的
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修身、齐家、治国、平天下
8楼2013-01-29 13:04:09
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植物园园长

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用天根的Fast Hifi快速高保真酶可以的~
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在路上～～Marketing!
9楼2013-01-31 09:31:55
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用phusion等适合长片段的酶应该是没问题的。
如果有困难，可以分段扩增。
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10楼2013-01-31 10:24:17
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