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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 7kb的片段用PCR能P得出来么？
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shine372

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zjhn: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-31 15:49:10
是P的出来的，我们P8k的都P的出来，关键是延伸的时间，如果是高保真酶的话，延伸时间要更长一点，这个延伸时间还与你的模板的复杂度有关系的，越复杂的模板，延伸时间要相应延长
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11楼2013-01-31 11:23:01
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zjhn

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by shine372 at 2013-01-31 11:23:01
是P的出来的，我们P8k的都P的出来，关键是延伸的时间，如果是高保真酶的话，延伸时间要更长一点，这个延伸时间还与你的模板的复杂度有关系的，越复杂的模板，延伸时间要相应延长

延伸时间是1kb/min这样算的么？你用的什么酶？
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12楼2013-01-31 15:49:51
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ccharlien

木虫 (正式写手)
Phusion扩过9K的质粒
以质粒为模板基本没问题的
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13楼2013-02-02 16:16:33
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shine372

木虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by zjhn at 2013-01-31 15:49:51
延伸时间是1kb/min这样算的么？你用的什么酶？...


我用的一种杂交酶，盘古基因的，你可以向他们申请个试用装来P一下，我就是申请了试用装
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14楼2013-02-02 17:18:54
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shine372

木虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by zjhn at 2013-01-31 15:49:51
延伸时间是1kb/min这样算的么？你用的什么酶？...

一般的Taq酶延伸时间约为1kb/min，高保真酶的扩增速度要慢一些，延伸时间约为500-600bp/min，我当时用的是Pod系列杂交酶
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15楼2013-02-02 17:23:41
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徐官冲123

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by gl1986825 at 2013-01-28 22:43:35
可以，最好用Prime Star这种高保真酶。一般没问题的

你好，我用的是TAKARA家的primerstar保真酶克隆6.5kb的片段，自认为按照说明书来的，但是没P出来，求克隆过大片段（5kb以上）的高手指教。引物长度是25，是不是短了？但是说明书上没要求引物长度呀。。。

我用过TAKARA家的 primerstar， 也用过全式金家的 FastPfu fly 保真酶都没P出来。麻烦看到回复我，谢谢
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16楼2015-07-18 15:44:10
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