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shine372

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zjhn: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-31 15:49:10
是P的出来的,我们P8k的都P的出来,关键是延伸的时间,如果是高保真酶的话,延伸时间要更长一点,这个延伸时间还与你的模板的复杂度有关系的,越复杂的模板,延伸时间要相应延长
11楼2013-01-31 11:23:01
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zjhn

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by shine372 at 2013-01-31 11:23:01
是P的出来的,我们P8k的都P的出来,关键是延伸的时间,如果是高保真酶的话,延伸时间要更长一点,这个延伸时间还与你的模板的复杂度有关系的,越复杂的模板,延伸时间要相应延长

延伸时间是1kb/min这样算的么?你用的什么酶?
12楼2013-01-31 15:49:51
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ccharlien

木虫 (正式写手)

Phusion扩过9K的质粒
以质粒为模板基本没问题的
13楼2013-02-02 16:16:33
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shine372

木虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by zjhn at 2013-01-31 15:49:51
延伸时间是1kb/min这样算的么?你用的什么酶?...


我用的一种杂交酶,盘古基因的,你可以向他们申请个试用装来P一下,我就是申请了试用装
14楼2013-02-02 17:18:54
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shine372

木虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by zjhn at 2013-01-31 15:49:51
延伸时间是1kb/min这样算的么?你用的什么酶?...

一般的Taq酶延伸时间约为1kb/min,高保真酶的扩增速度要慢一些,延伸时间约为500-600bp/min,我当时用的是Pod系列杂交酶
15楼2013-02-02 17:23:41
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徐官冲123

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by gl1986825 at 2013-01-28 22:43:35
可以,最好用Prime Star这种高保真酶。一般没问题的

你好,我用的是TAKARA家的primerstar保真酶克隆6.5kb的片段,自认为按照说明书来的,但是没P出来,求克隆过大片段(5kb以上)的高手指教。引物长度是25,是不是短了?但是说明书上没要求引物长度呀。。。

我用过TAKARA家的 primerstar, 也用过全式金家的 FastPfu fly 保真酶都没P出来。麻烦看到回复我,谢谢
16楼2015-07-18 15:44:10
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