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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pMD18-T载体不需要酶切吗
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额敏的雪

金虫 (著名写手)

[求助] pMD18-T载体不需要酶切吗 已有1人参与

为什么将带有相应酶切位点的基因连入pMD18-T载体时不需要对载体进行酶切？
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1楼 2013-01-28 13:07:02
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yesali

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
额敏的雪: 金币+2 2013-01-28 15:45:44
一般的taq酶做PCR时，PCR产物末端有突出的碱基A，pMD18-T载体有突出的碱基T，AT是互补的，故可以连接上
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2楼2013-01-28 13:17:19
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武京帅

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用的是TA克隆的方法  如楼上所说 不用再切了就
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To be all you what you can be!
3楼2013-01-28 15:09:02
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
嗯，楼上两位说的很正确，附和下！
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生物化学与分子生物学
4楼2013-01-28 17:23:16
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qiyaocheng

木虫 (小有名气)

老虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首先是不用酶切T载体，如上。其次要保证你的PCR产物有末端A，并不是所有扩增酶都有这个自动加A的功能，如PFU高保真酶
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毕业回望科研路，满目疮痍一身土
5楼2013-01-28 21:12:47
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mamadexiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不切
这个载体是个线性的，直接用
你用高保真酶PCR一般没有尾端加A，所以P完还得用普通的酶孵育下，加个A，就可以了，如果本身用的酶就有加A就不用孵育
两个直接连，就可以了
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6楼2013-01-28 22:52:46
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额敏的雪

金虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by mamadexiao at 2013-01-28 22:52:46
不切
这个载体是个线性的，直接用
你用高保真酶PCR一般没有尾端加A，所以P完还得用普通的酶孵育下，加个A，就可以了，如果本身用的酶就有加A就不用孵育
两个直接连，就可以了

谢谢
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7楼2013-01-29 10:51:16
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CUISHENGRONG

新虫 (小有名气)
好棒啊 谢谢各位

发自小木虫IOS客户端
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8楼2017-09-23 21:56:46
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左手abby

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by mamadexiao at 2013-01-28 22:52:46
不切
这个载体是个线性的，直接用
你用高保真酶PCR一般没有尾端加A，所以P完还得用普通的酶孵育下，加个A，就可以了，如果本身用的酶就有加A就不用孵育
两个直接连，就可以了

我最近在做加A，但是总是加不上，请问你做加A都是怎么的

发自小木虫Android客户端
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9楼2017-09-24 22:54:57
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王查查23

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
10楼2017-09-25 07:31:29
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