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youngsun50

木虫 (正式写手)

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[交流] 基因组文库构建时DNA酶切片段用胶回收吗？

RT，我构建的是细菌的基因组文库，基因组DNA BamHI酶切后显示大多在3K-7K,少数<3K,请问
1）我还用选择性的胶回收某个范围大小的片段吗，因为我也不知道我要的基因在多大片段上？
2）如果不回收的话怎么处理酶切后产物进行连接反应（用pUC19载体），我看有65度5min灭活限制酶的，可行吗？
谢谢，请大侠指点

[ Last edited by youngsun50 on 2012-1-2 at 10:18 ]

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1楼 2012-01-01 17:25:09

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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
小丹木木(金币+1): 回答的很艺术，也很简单明了哦 2012-01-12 08:34:18
youngsun50(金币+1): 2012-02-16 22:06:14

引用回帖:

7楼: Originally posted by youngsun50 at 2012-01-11 17:16:52:
谢谢！再请教几个问题：
1)酶切时是不完全酶切吗，我用的六碱基酶切过夜，结果小于2K的也有，并不集中在3k-8k间，我这样是不是不行啊?
2)一般构建文库需要DNA片段多少啊，0.1pmol够吗
3)转化一般要涂多少个板 ...

1)酶切时是不完全酶切吗，我用的六碱基酶切过夜，结果小于2K的也有，并不集中在3k-8k间，我这样是不是不行啊?
不完全酶切。

2)一般构建文库需要DNA片段多少啊，0.1pmol够吗
不够。

3)转化一般要涂多少个板子啊才能筛到自己想要的
运气有的时候很重要。

我第一次做，实验室也没做过的，问题有点多希望不要烦，最好能说一下各个步骤的注意心得啥的，谢谢高手了！！