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youngsun50

木虫 (正式写手)


[交流] 基因组文库构建时DNA酶切片段用胶回收吗?

RT,我构建的是细菌的基因组文库,基因组DNA BamHI酶切后显示大多在3K-7K,少数<3K,请问
1)我还用选择性的胶回收某个范围大小的片段吗,因为我也不知道我要的基因在多大片段上?
2)如果不回收的话怎么处理酶切后产物进行连接反应(用pUC19载体),我看有65度5min灭活限制酶的,可行吗?
谢谢,请大侠指点

[ Last edited by youngsun50 on 2012-1-2 at 10:18 ]
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youngsun50

木虫 (正式写手)


引用回帖:
: Originally posted by brightfuture01 at 2012-01-02 18:54:44:
文库构建时尽量用较大的片段,切胶回收没商量。

但我怕漏掉小片段啊,能用PCR回收试剂盒把所有的片段都回收做连接吗,小片段对连接没影响吧?
另,pUC载体最大能插入多大的片段啊?谢谢
4楼2012-01-02 20:57:01
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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
youngsun50(金币+1): 2012-01-02 21:08:08
西瓜(金币+1): 老专家,常来啊~ 2012-01-03 08:33:49
文库构建时尽量用较大的片段,切胶回收没商量。
2楼2012-01-02 18:54:44
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★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
youngsun50(金币+1): 2012-01-02 21:08:20
西瓜(金币+1): 欢迎常来~ 2012-01-03 08:32:48
你要先调查一下你的基因组中一般情况下基因的大小;一般都要用胶回收!
3楼2012-01-02 20:10:23
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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+1, 专家考核): Good! 2012-01-03 08:33:15
youngsun50(金币+2): 2012-01-11 17:08:58
引用回帖:
4楼: Originally posted by youngsun50 at 2012-01-02 20:57:01:
但我怕漏掉小片段啊,能用PCR回收试剂盒把所有的片段都回收做连接吗,小片段对连接没影响吧?
另,pUC载体最大能插入多大的片段啊?谢谢

  <10kb, 你需要补充下文库质量评价方面的知识。

有一个概念你需要自己查一下:覆盖度
5楼2012-01-02 23:17:07
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