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aayqaa

铁虫 (初入文坛)

[求助] 小片段DNA割胶回收求助已有7人参与

小片段230bp左右,酶切后割胶回收效率极低,用takara的试剂盒回收后跑胶看不到目的条带,想问下出了用试剂盒还有没有比较好的回收方法?操作步骤是什么?试剂是怎么配的?
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viki_MDK

银虫 (正式写手)

跑胶是加大上样量。
4楼2014-06-08 13:05:21
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317429561

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
aayqaa: 金币+1, 有帮助 2014-06-09 07:24:45
我用过天恩泽的试剂盒也还可以
小木虫是一种态度
8楼2014-06-08 19:27:35
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

小于400bp回收加异丙醇

[ 发自小木虫客户端 ]
天道酬勤
11楼2014-06-10 12:37:01
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普通回帖

yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励交流! 2014-06-08 11:19:13
aayqaa: 金币+2, 有帮助 2014-06-08 13:17:47
看不到条带不代表回收不成功。你可以加大回收量或者二次PCR下,二次PCR可以检测回收产物有没有目的条带。
学习使你立于不败之地
2楼2014-06-08 10:50:04
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jmmchen

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
aayqaa: 金币+2, 有帮助 2014-06-08 13:18:05
aayqaa: 金币+2, 有帮助 2014-06-09 07:25:16
切胶回收,关键是你回收的目的片段量要多,可以多扩增几管,一起回收。回收一般都用试剂盒,可以采用天根的试剂盒,回收效率挺高的。你可以试一下。
面朝大海,春暖花开
3楼2014-06-08 13:00:05
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
aayqaa: 金币+1, 有帮助 2014-06-09 07:23:45
上样量一定要大,小片段本身就不好回收

另一方面,看一下你的试剂盒回收范围,有一种专门回收小片段的试剂盒
天行健
5楼2014-06-08 17:05:16
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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你可以考虑MN公司的试剂盒

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2014-06-08 18:39:28
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hailunl

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


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aayqaa: 金币+1, 有帮助 2014-06-09 07:24:02
小片段回收率很低,要加异丙醇的,另外看不见不等于没回收到,一样可以连接。
7楼2014-06-08 18:58:19
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BioChen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


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aayqaa: 金币+1, 有帮助 2014-06-09 07:24:31
100bp以上的片段,都能切胶回收成功。
你们的试剂盒有问题,这年头假试剂太多了。
把你们的样品送测序公司,订单上注明“切胶,返样”,测序费25元+切胶费10元,搞定。
以前在测序公司工作的时候,有客户就是这么干的。
9楼2014-06-08 21:36:28
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ma20112

新虫 (初入文坛)

量多一点,还有就是可能已经回收了,但是看不见
10楼2014-06-10 12:18:36
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