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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 小片段DNA割胶回收求助
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aayqaa

铁虫 (初入文坛)

[求助] 小片段DNA割胶回收求助 已有7人参与

小片段230bp左右，酶切后割胶回收效率极低，用takara的试剂盒回收后跑胶看不到目的条带，想问下出了用试剂盒还有没有比较好的回收方法？操作步骤是什么？试剂是怎么配的？
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1楼 2014-06-08 07:40:09
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

viki_MDK

银虫 (正式写手)
跑胶是加大上样量。
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4楼2014-06-08 13:05:21
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317429561

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
aayqaa: 金币+1, ★有帮助 2014-06-09 07:24:45
我用过天恩泽的试剂盒也还可以
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小木虫是一种态度
8楼2014-06-08 19:27:35
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)
小于400bp回收加异丙醇

[ 发自小木虫客户端 ]
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天道酬勤
11楼2014-06-10 12:37:01
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普通回帖

yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2014-06-08 11:19:13
aayqaa: 金币+2, ★有帮助 2014-06-08 13:17:47
看不到条带不代表回收不成功。你可以加大回收量或者二次PCR下，二次PCR可以检测回收产物有没有目的条带。
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学习使你立于不败之地
2楼2014-06-08 10:50:04
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jmmchen

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
aayqaa: 金币+2, ★有帮助 2014-06-08 13:18:05
aayqaa: 金币+2, ★有帮助 2014-06-09 07:25:16
切胶回收，关键是你回收的目的片段量要多，可以多扩增几管，一起回收。回收一般都用试剂盒，可以采用天根的试剂盒，回收效率挺高的。你可以试一下。
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面朝大海，春暖花开
3楼2014-06-08 13:00:05
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
aayqaa: 金币+1, ★有帮助 2014-06-09 07:23:45
上样量一定要大，小片段本身就不好回收

另一方面，看一下你的试剂盒回收范围，有一种专门回收小片段的试剂盒
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天行健
5楼2014-06-08 17:05:16
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以考虑MN公司的试剂盒

[ 发自小木虫客户端 ]
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6楼2014-06-08 18:39:28
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hailunl

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
aayqaa: 金币+1, ★有帮助 2014-06-09 07:24:02
小片段回收率很低，要加异丙醇的，另外看不见不等于没回收到，一样可以连接。
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7楼2014-06-08 18:58:19
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BioChen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
aayqaa: 金币+1, ★有帮助 2014-06-09 07:24:31
100bp以上的片段，都能切胶回收成功。
你们的试剂盒有问题，这年头假试剂太多了。
把你们的样品送测序公司，订单上注明“切胶，返样”，测序费25元+切胶费10元，搞定。
以前在测序公司工作的时候，有客户就是这么干的。
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9楼2014-06-08 21:36:28
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ma20112

新虫 (初入文坛)
量多一点，还有就是可能已经回收了，但是看不见
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10楼2014-06-10 12:18:36
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