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晴天雅子

新虫 (小有名气)

[求助] 80p 割胶回收

高人指点一下啊,我的pcr产物才80bp,很短,现在割胶回收不到片段,那怎么办啊?我用的是TAKARA的回收试剂盒,50bp-10kb的。再小的试剂盒也没有啊,要怎么办啊?请高手指点一下啊。谢谢!
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vir2008

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-06-11 13:59:06
引用回帖:
20楼: Originally posted by 晴天雅子 at 2012-06-08 12:21:52
请问两条配对的核苷酸链怎么合成啊,我之前是合成的模板引物。请问您这样做过吗,现在很是纠结啊...

目的片段配对,只是两端设计成酶切后的缺口状。
举个例子,若希望某片段5'有BamHI,3'有EcoRI酶切后的末端,则在正义链5'端添加GATCC,在反义链3'端加一个G;同时在反义链5'端加AATTC,在正义链3'端也添加一个G。两条链混合后预变性、逐渐冷却,就得到产物了。
只不过我做的是63bp的目的片段,不知道80bp是否可行。
21楼2012-06-08 17:35:26
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普通回帖

ilxly

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
最简单的方法是多P几管回收,还有溶胶完加点异丙醇提高与柱子的结合效率
2楼2012-06-06 11:06:14
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steler_ly

铜虫 (正式写手)

顶起!!
3楼2012-06-06 11:46:20
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基诺莱普

禁言 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

4楼2012-06-06 11:50:43
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晴天雅子

新虫 (小有名气)

我加异丙醇的啊,本来条带很亮,但割胶完一点亮度都没有啊。做的是抗菌肽啊,抗菌肽的片段一般都很短的哦。大家有谁有经验啊
白岩松—不平静,就不会幸福!
5楼2012-06-06 13:37:09
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yangbin1

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没有很好的办法。小片段在纯化中极易丢失。适当的加异丙醇会提高回收效率。另外就是加大初始用量
6楼2012-06-06 14:03:08
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hlwnxfd2011

银虫 (小有名气)

请教一下你是怎么区分80bp片段跟引物二聚体分的呢?可能问题有些幼稚哈。谢谢
7楼2012-06-06 15:22:35
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晴天雅子

新虫 (小有名气)

我的目的片段很亮的啊,下面是二聚体,能明显分开的
白岩松—不平静,就不会幸福!
8楼2012-06-06 16:40:36
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果子么么茶

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
大量产物回收 最后一步反复洗脱
9楼2012-06-06 16:43:28
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晴天雅子

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 果子么么茶 at 2012-06-06 16:43:28
大量产物回收 最后一步反复洗脱

跑的胶目的条带很亮的,关键是割胶回收用的1.5ml的ep管也不大啊,加上溶解液和异丙醇就很多了。上柱子的时候也装不下呢
白岩松—不平静,就不会幸福!
10楼2012-06-06 17:16:24
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