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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 80p 割胶回收
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zqk0532

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
跑6%的PAGE胶回收，可以的，效果很好
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11楼2012-06-06 17:17:09
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果子么么茶

木虫 (著名写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 晴天雅子 at 2012-06-06 17:16:24
跑的胶目的条带很亮的，关键是割胶回收用的1.5ml的ep管也不大啊，加上溶解液和异丙醇就很多了。上柱子的时候也装不下呢...

试着分别装 两个柱子最后洗脱到一起 反复洗
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12楼2012-06-06 17:39:22
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晴天雅子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by zqk0532 at 2012-06-06 17:17:09
跑6%的PAGE胶回收，可以的，效果很好

我的是DNA啊，可以跑PAGE 胶吗，那回收试剂盒用什么呢
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白岩松—不平静，就不会幸福！
13楼2012-06-06 18:51:35
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 斑斑辛苦了 2012-06-07 13:52:34
跑胶不是问题所在，是片段太短了，结合不到柱子上。一般100bp以下的核酸就很难了。我建议你还是放弃胶回收吧，直接去合成所需片段。
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14楼2012-06-06 19:07:00
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晴天雅子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-06-06 19:07:00
跑胶不是问题所在，是片段太短了，结合不到柱子上。一般100bp以下的核酸就很难了。我建议你还是放弃胶回收吧，直接去合成所需片段。

您说的合成片段是基因还是直接合成氨基酸啊？我设计的是引物模板啊，得到的Pcr产物亮度非常高，还能不能不割胶回收，直接做酶切啊，但酶切完不是还是要割胶回收才能连接载体吗
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白岩松—不平静，就不会幸福！
15楼2012-06-06 19:36:52
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zhixuec

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-06-08 14:10:47
一般小于300bp的片段都要加入异丙醇，这样可以提高回收效率

但是你的才80bp，太小了，极容易丢失片段，小片段与柱子的结合效率很低

向上面有人说的，就是多P几管产物，同时回收，肯定能回收到的

祝你好运~~！
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酷爱の族
16楼2012-06-06 22:42:08
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晴天雅子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by zhixuec at 2012-06-06 22:42:08
一般小于300bp的片段都要加入异丙醇，这样可以提高回收效率

但是你的才80bp，太小了，极容易丢失片段，小片段与柱子的结合效率很低

向上面有人说的，就是多P几管产物，同时回收，肯定能回收到的

祝你好运~ ...

我想问能不能不割胶回收啊，我的条带很亮，直接酶切和载体连接呢
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白岩松—不平静，就不会幸福！
17楼2012-06-07 08:47:12
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real-gold

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ilxly at 2012-06-06 11:06:14
最简单的方法是多P几管回收，还有溶胶完加点异丙醇提高与柱子的结合效率

你好，请教一下这个异丙醇的加入体积该怎么确定，异丙醇是与溶胶液一起加入的吧？
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18楼2012-06-07 20:57:55
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vir2008

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-06-08 14:11:03
片段太小了。就算你把PCR产物回收出来，酶切之后还得再次回收……

个人建议你以合成两条配对后带有所需粘性末端的核苷酸链，等量混合后预变性10min，随后室温缓慢冷却，就得到可用于连接的目的片段了。
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19楼2012-06-07 21:51:30
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晴天雅子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by vir2008 at 2012-06-07 21:51:30
片段太小了。就算你把PCR产物回收出来，酶切之后还得再次回收……

个人建议你以合成两条配对后带有所需粘性末端的核苷酸链，等量混合后预变性10min，随后室温缓慢冷却，就得到可用于连接的目的片段了。

请问两条配对的核苷酸链怎么合成啊，我之前是合成的模板引物。请问您这样做过吗，现在很是纠结啊
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白岩松—不平静，就不会幸福！
20楼2012-06-08 12:21:52
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