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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 80p 割胶回收
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晴天雅子

新虫 (小有名气)

[求助] 80p 割胶回收

高人指点一下啊，我的pcr产物才80bp,很短，现在割胶回收不到片段，那怎么办啊？我用的是TAKARA的回收试剂盒，50bp-10kb的。再小的试剂盒也没有啊，要怎么办啊？请高手指点一下啊。谢谢！
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白岩松—不平静，就不会幸福！
1楼 2012-06-06 09:41:48
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

vir2008

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-06-11 13:59:06
引用回帖:
20楼: Originally posted by 晴天雅子 at 2012-06-08 12:21:52
请问两条配对的核苷酸链怎么合成啊，我之前是合成的模板引物。请问您这样做过吗，现在很是纠结啊...

目的片段配对，只是两端设计成酶切后的缺口状。
举个例子，若希望某片段5'有BamHI，3'有EcoRI酶切后的末端，则在正义链5'端添加GATCC，在反义链3'端加一个G；同时在反义链5'端加AATTC，在正义链3'端也添加一个G。两条链混合后预变性、逐渐冷却，就得到产物了。
只不过我做的是63bp的目的片段，不知道80bp是否可行。
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21楼2012-06-08 17:35:26
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普通回帖

ilxly

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
最简单的方法是多P几管回收，还有溶胶完加点异丙醇提高与柱子的结合效率
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2楼2012-06-06 11:06:14
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steler_ly

铜虫 (正式写手)
顶起！！
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3楼2012-06-06 11:46:20
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基诺莱普

禁言 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
4楼2012-06-06 11:50:43
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晴天雅子

新虫 (小有名气)
我加异丙醇的啊，本来条带很亮，但割胶完一点亮度都没有啊。做的是抗菌肽啊，抗菌肽的片段一般都很短的哦。大家有谁有经验啊
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白岩松—不平静，就不会幸福！
5楼2012-06-06 13:37:09
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yangbin1

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没有很好的办法。小片段在纯化中极易丢失。适当的加异丙醇会提高回收效率。另外就是加大初始用量
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6楼2012-06-06 14:03:08
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hlwnxfd2011

银虫 (小有名气)
请教一下你是怎么区分80bp片段跟引物二聚体分的呢？可能问题有些幼稚哈。谢谢
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7楼2012-06-06 15:22:35
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晴天雅子

新虫 (小有名气)
我的目的片段很亮的啊，下面是二聚体，能明显分开的
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白岩松—不平静，就不会幸福！
8楼2012-06-06 16:40:36
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果子么么茶

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
大量产物回收 最后一步反复洗脱
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9楼2012-06-06 16:43:28
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晴天雅子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 果子么么茶 at 2012-06-06 16:43:28
大量产物回收 最后一步反复洗脱

跑的胶目的条带很亮的，关键是割胶回收用的1.5ml的ep管也不大啊，加上溶解液和异丙醇就很多了。上柱子的时候也装不下呢
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白岩松—不平静，就不会幸福！
10楼2012-06-06 17:16:24
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