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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 割胶回收后的DNA片段如何做克隆？
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uuu555000

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[交流] 割胶回收后的DNA片段如何做克隆？

割胶回收后的DNA片段如何做克隆？
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1楼 2012-07-26 19:15:38
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

liuyu_sdili

木虫 (正式写手)
★ ★
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uuu555000: 金币+1 2012-07-27 18:27:18
如果两端有合适的位点，可以酶切载体后连接克隆。
如果对于序列信息一无所知，可以利用taq酶在两端加A，克隆到T载体中，做进一步分析~~~
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3楼2012-07-26 20:15:25
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普通回帖

yuzhiming

捐助贵宾 (知名作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流问题。 2012-07-26 21:57:38
uuu555000: 金币+1 2012-07-27 18:27:21
直接酶切。连接到终载体中

或者直接连入中间过渡载体。测序验证后在做后续酶切连接。
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2楼2012-07-26 19:39:18
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)
★
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直接切酶应该可以吧。
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4楼2012-07-26 20:52:00
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thunder00

木虫 (著名写手)
运用T载体克隆
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5楼2012-07-26 21:46:00
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691740067

金虫 (小有名气)
★ ★
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uuu555000: 金币+1 2012-07-27 18:27:28
如果是taq酶扩的，直接连T载体最简单。
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6楼2012-07-26 22:00:50
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杨硕菲

木虫 (正式写手)
顶一个
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7楼2012-07-26 22:05:21
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damaomao

禁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
8楼2012-07-27 10:40:03
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uuu555000

捐助贵宾 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yuzhiming at 2012-07-26 19:39:18
直接酶切。连接到终载体中

或者直接连入中间过渡载体。测序验证后在做后续酶切连接。

pcr产物回收的DNA片段
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9楼2012-07-27 11:58:00
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0008meng

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by liuyu_sdili at 2012-07-26 20:15:25
如果两端有合适的位点，可以酶切载体后连接克隆。
如果对于序列信息一无所知，可以利用taq酶在两端加A，克隆到T载体中，做进一步分析~~~

很好
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10楼2012-07-27 13:14:15
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动力泉

金虫 (正式写手)
★
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选择合适的载体连接后，转化就行了。转化后可以酶切验证或者pcr验证
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12楼2012-07-29 11:18:24
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云破月来xxz

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
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uuu555000: 金币+2 2012-07-29 12:04:17
一般用普通Taq酶3‘末端会加A，可以T载体连接，效率比较高，可以做一个亚克隆，然后提质粒获得克隆。
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13楼2012-07-29 12:01:25
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trizol11

木虫 (正式写手)
★
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我觉得PCR产物回收后，直接转化，加培养液，涂板就可以了，酶切啥的都是浮云
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14楼2012-07-29 12:20:01
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trizol11

木虫 (正式写手)
★
uuu555000: 金币+1 2012-07-29 15:14:36
引用回帖:
14楼: Originally posted by trizol11 at 2012-07-29 12:20:01
我觉得PCR产物回收后，直接转化，加培养液，涂板就可以了，酶切啥的都是浮云

对了，在转化前做个连接，
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15楼2012-07-29 12:21:45
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qaz139687

新虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
15楼: Originally posted by trizol11 at 2012-07-29 12:21:45
对了，在转化前做个连接，...

连接加的试剂量着么算
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16楼2014-12-24 19:49:13
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zhengkning11楼
2012-07-27 13:43   回复  
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