24小时热门版块排行榜    

查看: 2501  |  回复: 15

uuu555000

捐助贵宾 (正式写手)


[交流] 割胶回收后的DNA片段如何做克隆?

割胶回收后的DNA片段如何做克隆?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

liuyu_sdili

木虫 (正式写手)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
uuu555000: 金币+1 2012-07-27 18:27:18
如果两端有合适的位点,可以酶切载体后连接克隆。
如果对于序列信息一无所知,可以利用taq酶在两端加A,克隆到T载体中,做进一步分析~~~
3楼2012-07-26 20:15:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

yuzhiming

捐助贵宾 (知名作家)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流问题。 2012-07-26 21:57:38
uuu555000: 金币+1 2012-07-27 18:27:21
直接酶切。连接到终载体中

或者直接连入中间过渡载体。测序验证后在做后续酶切连接。
2楼2012-07-26 19:39:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
直接切酶应该可以吧。
4楼2012-07-26 20:52:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

thunder00

木虫 (著名写手)


运用T载体克隆
5楼2012-07-26 21:46:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

691740067

金虫 (小有名气)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
uuu555000: 金币+1 2012-07-27 18:27:28
如果是taq酶扩的,直接连T载体最简单。
6楼2012-07-26 22:00:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杨硕菲

木虫 (正式写手)


顶一个
7楼2012-07-26 22:05:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

damaomao

禁虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖内容被屏蔽

8楼2012-07-27 10:40:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

uuu555000

捐助贵宾 (正式写手)


引用回帖:
2楼: Originally posted by yuzhiming at 2012-07-26 19:39:18
直接酶切。连接到终载体中

或者直接连入中间过渡载体。测序验证后在做后续酶切连接。

pcr产物回收的DNA片段
9楼2012-07-27 11:58:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

0008meng

至尊木虫 (正式写手)


引用回帖:
3楼: Originally posted by liuyu_sdili at 2012-07-26 20:15:25
如果两端有合适的位点,可以酶切载体后连接克隆。
如果对于序列信息一无所知,可以利用taq酶在两端加A,克隆到T载体中,做进一步分析~~~

很好
10楼2012-07-27 13:14:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

动力泉

金虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
选择合适的载体连接后,转化就行了。转化后可以酶切验证或者pcr验证
12楼2012-07-29 11:18:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

云破月来xxz

银虫 (小有名气)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
uuu555000: 金币+2 2012-07-29 12:04:17
一般用普通Taq酶3‘末端会加A,可以T载体连接,效率比较高,可以做一个亚克隆,然后提质粒获得克隆。
13楼2012-07-29 12:01:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

trizol11

木虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我觉得PCR产物回收后,直接转化,加培养液,涂板就可以了,酶切啥的都是浮云
14楼2012-07-29 12:20:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

trizol11

木虫 (正式写手)



uuu555000: 金币+1 2012-07-29 15:14:36
引用回帖:
14楼: Originally posted by trizol11 at 2012-07-29 12:20:01
我觉得PCR产物回收后,直接转化,加培养液,涂板就可以了,酶切啥的都是浮云

对了,在转化前做个连接,
15楼2012-07-29 12:21:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qaz139687

新虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
15楼: Originally posted by trizol11 at 2012-07-29 12:21:45
对了,在转化前做个连接,...

连接加的试剂量着么算
16楼2014-12-24 19:49:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
zhengkning11楼
2012-07-27 13:43   回复  
相关版块跳转 我要订阅楼主 uuu555000 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +16 晴天加油 2026-08-26 18/900 2026-09-02 09:39 by 昵称告罄
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题,而不是去凝练问题 +3 瞬息宇宙 2026-09-01 5/250 2026-09-02 08:01 by anjeeshine
[基金申请] 面上函评意见出来了,像什么等级? 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
信息提示
请填处理意见