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yinsongna

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】关于PCR 已有3人参与

最近做重叠延伸PCR,是分六段合,标号为1,2,3,4,5,6,P出这六段后,两两合成都可以,1+2,3+4,5+6,也都P的出来,而且杂带也不多,我就直接拿pCR产物继续P了,但是再往后加就怎么也出不来了,原来怀疑是引物的问题,重新设计引物之后,还是老样子,P出来的东西跑电泳就是白花花的一片,这个PCR做了快一个月了  要是做出来了就可以回家了  伤啊 哪位高人解决一下吧
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yinsongna

金虫 (正式写手)

做个沙发 在线等
2楼2010-08-04 15:26:23
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

yinsongna(金币+1): 2010-08-04 17:37:10
恐怕是后来加的引物和前面的引物,存在非常稳定的二聚体,放到一起检测一下
3楼2010-08-04 15:56:42
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yinsongna

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-08-04 15:56:42:
恐怕是后来加的引物和前面的引物,存在非常稳定的二聚体,放到一起检测一下

怎么检测啊
4楼2010-08-04 17:37:20
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zj408694018

金虫 (正式写手)

yinsongna(金币+1): 2010-08-04 19:32:37
回收之后再P吧
5楼2010-08-04 17:54:32
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yujiaping1

木虫 (著名写手)


amisking(金币+1):欢迎交流! 2010-08-04 20:42:49
引用回帖:
Originally posted by yinsongna at 2010-08-04 17:37:20:

怎么检测啊

用软件检测,引物设计软件
笨办法把这些序列人为的都放一起,设计引物,不就能检测了
不过应该有能检测引物二聚体的软件,就是我也不知道

[ Last edited by yujiaping1 on 2010-8-4 at 18:05 ]
6楼2010-08-04 18:03:22
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yinsongna

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by zj408694018 at 2010-08-04 17:54:32:
回收之后再P吧

回收与不回收的区别在哪儿呢  拿PCR产物做模板不至于什么都P不出来啊
7楼2010-08-04 19:32:33
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zj408694018

金虫 (正式写手)

yinsongna(金币+1): 2010-08-05 11:41:54
我通常都是回收之后再稀释100倍做模板,pcr的效果很好的,你那个要是没有稀释的话可能p不出来的
8楼2010-08-05 11:28:41
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yinsongna

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by zj408694018 at 2010-08-05 11:28:41:
我通常都是回收之后再稀释100倍做模板,pcr的效果很好的,你那个要是没有稀释的话可能p不出来的

额。。。可否解释一下原因恩
9楼2010-08-05 11:42:14
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zj408694018

金虫 (正式写手)

yinsongna(金币+1): 2010-08-05 13:15:28
你P完之后你的模板浓度很高,再用它直接做模板的话影响引物与它结合,简单的说,就是你的模板量太多了,可能PCR的时候只几个循环就结合不上去了
10楼2010-08-05 11:57:47
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