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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于PCR
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yinsongna

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】关于PCR 已有3人参与

最近做重叠延伸PCR，是分六段合，标号为1，2，3，4，5，6，P出这六段后，两两合成都可以，1+2，3+4，5+6，也都P的出来，而且杂带也不多，我就直接拿pCR产物继续P了，但是再往后加就怎么也出不来了，原来怀疑是引物的问题，重新设计引物之后，还是老样子，P出来的东西跑电泳就是白花花的一片，这个PCR做了快一个月了  要是做出来了就可以回家了  伤啊 哪位高人解决一下吧
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1楼 2010-08-04 15:26:11
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yinsongna

金虫 (正式写手)
做个沙发 在线等
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2楼2010-08-04 15:26:23
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
yinsongna(金币+1): 2010-08-04 17:37:10
恐怕是后来加的引物和前面的引物，存在非常稳定的二聚体，放到一起检测一下
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3楼2010-08-04 15:56:42
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yinsongna

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-08-04 15:56:42:
恐怕是后来加的引物和前面的引物，存在非常稳定的二聚体，放到一起检测一下

怎么检测啊
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4楼2010-08-04 17:37:20
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zj408694018

金虫 (正式写手)
yinsongna(金币+1): 2010-08-04 19:32:37
回收之后再P吧
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5楼2010-08-04 17:54:32
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
amisking(金币+1):欢迎交流！ 2010-08-04 20:42:49
引用回帖:
Originally posted by yinsongna at 2010-08-04 17:37:20:

怎么检测啊

用软件检测，引物设计软件
笨办法把这些序列人为的都放一起，设计引物，不就能检测了
不过应该有能检测引物二聚体的软件，就是我也不知道

[ Last edited by yujiaping1 on 2010-8-4 at 18:05 ]
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6楼2010-08-04 18:03:22
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yinsongna

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zj408694018 at 2010-08-04 17:54:32:
回收之后再P吧

回收与不回收的区别在哪儿呢  拿PCR产物做模板不至于什么都P不出来啊
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7楼2010-08-04 19:32:33
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zj408694018

金虫 (正式写手)
yinsongna(金币+1): 2010-08-05 11:41:54
我通常都是回收之后再稀释100倍做模板，pcr的效果很好的，你那个要是没有稀释的话可能p不出来的
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8楼2010-08-05 11:28:41
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yinsongna

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zj408694018 at 2010-08-05 11:28:41:
我通常都是回收之后再稀释100倍做模板，pcr的效果很好的，你那个要是没有稀释的话可能p不出来的

额。。。可否解释一下原因恩
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9楼2010-08-05 11:42:14
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zj408694018

金虫 (正式写手)
yinsongna(金币+1): 2010-08-05 13:15:28
你P完之后你的模板浓度很高，再用它直接做模板的话影响引物与它结合，简单的说，就是你的模板量太多了，可能PCR的时候只几个循环就结合不上去了
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10楼2010-08-05 11:57:47
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