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yinsongna

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】关于PCR已有3人参与

最近做重叠延伸PCR,是分六段合,标号为1,2,3,4,5,6,P出这六段后,两两合成都可以,1+2,3+4,5+6,也都P的出来,而且杂带也不多,我就直接拿pCR产物继续P了,但是再往后加就怎么也出不来了,原来怀疑是引物的问题,重新设计引物之后,还是老样子,P出来的东西跑电泳就是白花花的一片,这个PCR做了快一个月了  要是做出来了就可以回家了  伤啊 哪位高人解决一下吧
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zj408694018

金虫 (正式写手)

yinsongna(金币+1): 2010-08-04 19:32:37
回收之后再P吧
5楼2010-08-04 17:54:32
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zj408694018

金虫 (正式写手)

yinsongna(金币+1): 2010-08-05 11:41:54
我通常都是回收之后再稀释100倍做模板,pcr的效果很好的,你那个要是没有稀释的话可能p不出来的
8楼2010-08-05 11:28:41
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zj408694018

金虫 (正式写手)

yinsongna(金币+1): 2010-08-05 13:15:28
你P完之后你的模板浓度很高,再用它直接做模板的话影响引物与它结合,简单的说,就是你的模板量太多了,可能PCR的时候只几个循环就结合不上去了
10楼2010-08-05 11:57:47
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