24小时热门版块排行榜    

查看: 1864  |  回复: 12

leezz

铜虫 (小有名气)

愤青

[求助] RNA PCR有关问题

hi,大家好:
    请问大家有没有做RNA PCR的,对于一条序列未知的RNA怎么PCR呢?有没有RNA PCR相关的通用引物。谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

yjcheng

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking: 回帖置顶 2013-01-04 20:01:58
amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流问题。 2013-01-04 20:02:05
上面回答有两次笔误,一是PolyT;二,是随机引物不是随机引物不是简并引物。

你的RNA中是否有PolyA,若有可用PolyT作为一条引物,另外一条可用6个或8个核苷酸的随机引物。扩增出片段之后测序。再做inverse PCR (IPCR)(Huang, Molecular Biotechnology,2: 15–22.1994).就可以得到侧翼的序列 。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2013-01-04 15:42:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

yjcheng

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2013-01-04 20:01:53
你的RNA中是否有PolyA,若有可用Poly作为一条引物,另外一条可用6个或8个核苷酸的简并引物。扩增出片段之后测序。再做inverse PCR (IPCR)(Huang, Molecular Biotechnology,2: 15–22.1994).就可以得到侧翼的序列 。
2楼2013-01-04 15:38:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
第一次听说RNA还能做PCR的,是我孤陋寡闻了吗?生命体中的RNA不是单链的吗,它没有像DNA那样的复制机理。有病毒编码的酶能够以单链RNA为模板形成dsRNA的。PCR是以DNA为模板的扩增技术,一般想扩增RNA需要先反转录成cDNA才能PCR吧。
3楼2013-01-04 15:39:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yjcheng

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-04 15:39:14
第一次听说RNA还能做PCR的,是我孤陋寡闻了吗?生命体中的RNA不是单链的吗,它没有像DNA那样的复制机理。有病毒编码的酶能够以单链RNA为模板形成dsRNA的。PCR是以DNA为模板的扩增技术,一般想扩增RNA需要先反转录成 ...

一步RT-PCR知道不?!
5楼2013-01-04 15:49:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

leezz

铜虫 (小有名气)

愤青

引用回帖:
5楼: Originally posted by yjcheng at 2013-01-04 15:49:40
一步RT-PCR知道不?!...

这个知道,但是我的序列不知道呀
6楼2013-01-04 17:20:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

leezz

铜虫 (小有名气)

愤青

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-04 15:39:14
第一次听说RNA还能做PCR的,是我孤陋寡闻了吗?生命体中的RNA不是单链的吗,它没有像DNA那样的复制机理。有病毒编码的酶能够以单链RNA为模板形成dsRNA的。PCR是以DNA为模板的扩增技术,一般想扩增RNA需要先反转录成 ...

哈哈,是我说的不够严谨
7楼2013-01-04 17:21:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

leezz

铜虫 (小有名气)

愤青

送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by yjcheng at 2013-01-04 15:42:53
上面回答有两次笔误,一是PolyT;二,是随机引物不是随机引物不是简并引物。

你的RNA中是否有PolyA,若有可用PolyT作为一条引物,另外一条可用6个或8个核苷酸的随机引物。扩增出片段之后测序。再做inverse PCR (I ...

非常感谢
8楼2013-01-04 17:21:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
leezz: 金币+2 2013-01-05 08:32:52
引用回帖:
5楼: Originally posted by yjcheng at 2013-01-04 15:49:40
一步RT-PCR知道不?!...

一步RT-PCR不是把反转录和PCR合并成一次反应实现吗。PCR的还是DNA吧,如果是RNA是不能PCR的。PCR是DNA聚合酶链式反应。RNA没有这个反应。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

9楼2013-01-05 08:06:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
leezz: 金币+28, 3 2013-01-05 08:33:00
合成第一条单链cDNA的话是有通用引物的。如果是真核生物,引物是用oligodT,因为mRNA上带polyA。原核生物用随机引物。如果目的基因已知,可以用3'引物,扩增效率会比通用引物高很多。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

10楼2013-01-05 08:09:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 leezz 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +19 羊腰板 2026-08-21 22/1100 2026-08-25 10:38 by popular289
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +5 process2012 2026-08-23 7/350 2026-08-25 09:42 by huixian257
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +17 kkkl_v 2026-08-19 18/900 2026-08-25 09:41 by windflowerwy
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +7 炎黄贵胄 2026-08-22 8/400 2026-08-25 08:48 by ZJTJZ
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +25 yaoyewhu2008 2026-08-20 27/1350 2026-08-25 08:01 by Equinoxhua
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +7 图啦图啦 2026-08-24 8/400 2026-08-24 22:00 by maomao_da
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤?
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 什么时候开奖? +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗? +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
信息提示
请填处理意见