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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA PCR有关问题
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leezz

铜虫 (小有名气)

愤青

[求助] RNA PCR有关问题

hi，大家好：
    请问大家有没有做RNA PCR的，对于一条序列未知的RNA怎么PCR呢？有没有RNA PCR相关的通用引物。谢谢
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1楼 2013-01-04 14:13:13
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yjcheng

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2013-01-04 20:01:53
你的RNA中是否有PolyA,若有可用Poly作为一条引物，另外一条可用6个或8个核苷酸的简并引物。扩增出片段之后测序。再做inverse PCR (IPCR)(Huang, Molecular Biotechnology,2: 15–22.1994).就可以得到侧翼的序列 。
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2楼2013-01-04 15:38:47
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
第一次听说RNA还能做PCR的，是我孤陋寡闻了吗？生命体中的RNA不是单链的吗，它没有像DNA那样的复制机理。有病毒编码的酶能够以单链RNA为模板形成dsRNA的。PCR是以DNA为模板的扩增技术，一般想扩增RNA需要先反转录成cDNA才能PCR吧。
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3楼2013-01-04 15:39:14
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yjcheng

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking: 回帖置顶 2013-01-04 20:01:58
amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流问题。 2013-01-04 20:02:05
上面回答有两次笔误，一是PolyT；二，是随机引物不是随机引物不是简并引物。

你的RNA中是否有PolyA,若有可用PolyT作为一条引物，另外一条可用6个或8个核苷酸的随机引物。扩增出片段之后测序。再做inverse PCR (IPCR)(Huang, Molecular Biotechnology,2: 15–22.1994).就可以得到侧翼的序列 。
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leezz
4楼2013-01-04 15:42:53
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yjcheng

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-04 15:39:14
第一次听说RNA还能做PCR的，是我孤陋寡闻了吗？生命体中的RNA不是单链的吗，它没有像DNA那样的复制机理。有病毒编码的酶能够以单链RNA为模板形成dsRNA的。PCR是以DNA为模板的扩增技术，一般想扩增RNA需要先反转录成 ...

一步RT-PCR知道不？！
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5楼2013-01-04 15:49:40
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leezz

铜虫 (小有名气)

愤青
引用回帖:
5楼: Originally posted by yjcheng at 2013-01-04 15:49:40
一步RT-PCR知道不？！...

这个知道，但是我的序列不知道呀
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6楼2013-01-04 17:20:33
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leezz

铜虫 (小有名气)

愤青
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-04 15:39:14
第一次听说RNA还能做PCR的，是我孤陋寡闻了吗？生命体中的RNA不是单链的吗，它没有像DNA那样的复制机理。有病毒编码的酶能够以单链RNA为模板形成dsRNA的。PCR是以DNA为模板的扩增技术，一般想扩增RNA需要先反转录成 ...

哈哈，是我说的不够严谨
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7楼2013-01-04 17:21:28
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leezz

铜虫 (小有名气)

愤青
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by yjcheng at 2013-01-04 15:42:53
上面回答有两次笔误，一是PolyT；二，是随机引物不是随机引物不是简并引物。

你的RNA中是否有PolyA,若有可用PolyT作为一条引物，另外一条可用6个或8个核苷酸的随机引物。扩增出片段之后测序。再做inverse PCR (I ...

非常感谢
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8楼2013-01-04 17:21:53
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
leezz: 金币+2 2013-01-05 08:32:52
引用回帖:
5楼: Originally posted by yjcheng at 2013-01-04 15:49:40
一步RT-PCR知道不？！...

一步RT-PCR不是把反转录和PCR合并成一次反应实现吗。PCR的还是DNA吧，如果是RNA是不能PCR的。PCR是DNA聚合酶链式反应。RNA没有这个反应。
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wangweida2
9楼2013-01-05 08:06:21
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
leezz: 金币+28, 3 2013-01-05 08:33:00
合成第一条单链cDNA的话是有通用引物的。如果是真核生物，引物是用oligodT，因为mRNA上带polyA。原核生物用随机引物。如果目的基因已知，可以用3'引物，扩增效率会比通用引物高很多。
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leezz
10楼2013-01-05 08:09:45
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