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leezz

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[求助] RNA PCR有关问题

hi，大家好：
请问大家有没有做RNA PCR的，对于一条序列未知的RNA怎么PCR呢？有没有RNA PCR相关的通用引物。谢谢

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1楼 2013-01-04 14:13:13

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yjcheng

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【答案】应助回帖

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你的RNA中是否有PolyA,若有可用Poly作为一条引物，另外一条可用6个或8个核苷酸的简并引物。扩增出片段之后测序。再做inverse PCR (IPCR)(Huang, Molecular Biotechnology,2: 15–22.1994).就可以得到侧翼的序列。

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2楼2013-01-04 15:38:47

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cicelyzh

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【答案】应助回帖

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第一次听说RNA还能做PCR的，是我孤陋寡闻了吗？生命体中的RNA不是单链的吗，它没有像DNA那样的复制机理。有病毒编码的酶能够以单链RNA为模板形成dsRNA的。PCR是以DNA为模板的扩增技术，一般想扩增RNA需要先反转录成cDNA才能PCR吧。

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3楼2013-01-04 15:39:14

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yjcheng

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amisking: 回帖置顶 2013-01-04 20:01:58
amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流问题。 2013-01-04 20:02:05

上面回答有两次笔误，一是PolyT；二，是随机引物不是随机引物不是简并引物。

你的RNA中是否有PolyA,若有可用PolyT作为一条引物，另外一条可用6个或8个核苷酸的随机引物。扩增出片段之后测序。再做inverse PCR (IPCR)(Huang, Molecular Biotechnology,2: 15–22.1994).就可以得到侧翼的序列。

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leezz

4楼2013-01-04 15:42:53

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引用回帖:

3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-04 15:39:14
第一次听说RNA还能做PCR的，是我孤陋寡闻了吗？生命体中的RNA不是单链的吗，它没有像DNA那样的复制机理。有病毒编码的酶能够以单链RNA为模板形成dsRNA的。PCR是以DNA为模板的扩增技术，一般想扩增RNA需要先反转录成 ...

一步RT-PCR知道不？！

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5楼2013-01-04 15:49:40

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