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leezz

铜虫 (小有名气)

愤青

[求助] RNA PCR有关问题

hi,大家好:
    请问大家有没有做RNA PCR的,对于一条序列未知的RNA怎么PCR呢?有没有RNA PCR相关的通用引物。谢谢
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wangweida2

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-05 08:06:21
一步RT-PCR不是把反转录和PCR合并成一次反应实现吗。PCR的还是DNA吧,如果是RNA是不能PCR的。PCR是DNA聚合酶链式反应。RNA没有这个反应。...

是的,一步法是把逆转录和扩增在一管里反应。原理仍然是以cDNA为模板进行扩增。如果RNA能够直接扩增我非常感兴趣。
13楼2013-07-19 11:14:05
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yjcheng

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2013-01-04 20:01:53
你的RNA中是否有PolyA,若有可用Poly作为一条引物,另外一条可用6个或8个核苷酸的简并引物。扩增出片段之后测序。再做inverse PCR (IPCR)(Huang, Molecular Biotechnology,2: 15–22.1994).就可以得到侧翼的序列 。
2楼2013-01-04 15:38:47
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
第一次听说RNA还能做PCR的,是我孤陋寡闻了吗?生命体中的RNA不是单链的吗,它没有像DNA那样的复制机理。有病毒编码的酶能够以单链RNA为模板形成dsRNA的。PCR是以DNA为模板的扩增技术,一般想扩增RNA需要先反转录成cDNA才能PCR吧。
3楼2013-01-04 15:39:14
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yjcheng

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking: 回帖置顶 2013-01-04 20:01:58
amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流问题。 2013-01-04 20:02:05
上面回答有两次笔误,一是PolyT;二,是随机引物不是随机引物不是简并引物。

你的RNA中是否有PolyA,若有可用PolyT作为一条引物,另外一条可用6个或8个核苷酸的随机引物。扩增出片段之后测序。再做inverse PCR (IPCR)(Huang, Molecular Biotechnology,2: 15–22.1994).就可以得到侧翼的序列 。

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4楼2013-01-04 15:42:53
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