应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR产物再进行PCR
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
201/1返回列表
查看: 4332  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

晓婧happy

铜虫 (初入文坛)

[交流] PCR产物再进行PCR

大家有木有做过PCR回收产物为模板扩增目的基因啊？我听说是可行的，可我们老师说不稳定，很不稳定，大家给个意见吧，谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-04-12 14:47:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

gaoyang636

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
晓婧happy(金币+1): 谢谢参与
amisking: 金币+3, 鼓励帮助解答，欢迎继续交流。 2012-04-12 17:54:23
西瓜: 回帖置顶 2012-04-12 23:45:25
有一个问题你没说清楚：PCR产物回收后做模板再次进行PCR，那么这个第二轮 PCR的引物是另一套，还是相同的引物？
如果是另一套，比如内测引物，这种nested-PCR没问题，并且常常使用；
而如果是相同引物，的确不稳定：
产物做模板的浓度需要摸索；由于Taq酶的不保真引起的产物轻微差别也会有不利影响等等；所以说，可以考虑将回收产物转化并筛菌，拿菌液做模板，就很容易了
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2012-04-12 16:03:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

ycttfeng

木虫 (小有名气)
★
晓婧happy(金币+1): 谢谢参与
可行啊
回复此楼
2楼2012-04-12 14:54:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

imyting

至尊木虫 (正式写手)
★
晓婧happy(金币+1): 谢谢参与
可行
回复此楼
3楼2012-04-12 15:22:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

风之语007

金虫 (小有名气)
★
晓婧happy(金币+1): 谢谢参与
可行的
回复此楼
4楼2012-04-12 15:50:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dfl204

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
晓婧happy(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+2, Good！ 2012-04-12 23:45:14
如果第一轮PCR产物量很低的话可以用来作为下一轮PCR的模板。
巢氏PCR都是经过两轮扩增的。

用高保值度的酶和较高的退火温度是可以基本保证产物的特异性的。
赞一下 回复此楼
5楼2012-04-12 16:01:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

晓婧happy

铜虫 (初入文坛)
西瓜: , 绝对可行！ 2012-04-12 23:45:48
引用回帖:
6楼: Originally posted by gaoyang636 at 2012-04-12 16:03:57:
有一个问题你没说清楚：PCR产物回收后做模板再次进行PCR，那么这个第二轮 PCR的引物是另一套，还是相同的引物？
如果是另一套，比如内测引物，这种nested-PCR没问题，并且常常使用；
而如果是相同引物，的确不稳 ...

不是相同的引物，是想从得到的基因片段上再扩增出一部分片段，这样是可行的吧？我现在也做了转化了，以后就用菌液当模板了
赞一下 回复此楼
7楼2012-04-12 16:18:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

晓婧happy

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by dfl204 at 2012-04-12 16:01:08:
如果第一轮PCR产物量很低的话可以用来作为下一轮PCR的模板。
巢氏PCR都是经过两轮扩增的。

用高保值度的酶和较高的退火温度是可以基本保证产物的特异性的。

那我是不是需要提高退火温度啊？
赞一下 回复此楼
8楼2012-04-12 16:20:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

可帅儿

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
没试过，不过可以尝试一下
赞一下 回复此楼
9楼2012-04-12 18:29:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ouyangtao0102

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西瓜: 金币+2, Good！ 2012-04-12 23:46:04
非常同意虫友“gaoyang636”所说的。不同引物的话基本没问题，可以扩增出来，如果第二轮PCR用的是同一对引物的话有的时候可以扩出来，但有的时候是一片涂抹带。如果第二轮用的不是同一对引物，不需要特意去提高退火温度，按照你的这对引物的退火温度去扩增就是了。
赞一下 回复此楼
10楼2012-04-12 21:53:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

julietguo

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我最近也在做nested-PCR，效果挺好的。不过如果可以的话，还是设计一对特异性高一点的引物，这样省得要做两次PCR。
赞一下 回复此楼
11楼2012-04-13 08:15:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qqm8445

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以呀，我经常这样做，没有问题，说有摸带的，是因为模板量太高了，可能要稀释PCR产物100倍，甚至200倍后再做，效果就很好了。
赞一下 回复此楼
12楼2012-04-13 08:31:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dappxiaomm

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我做过，用的不同的引物，从两端开始P，可以的
赞一下 回复此楼
13楼2012-04-13 08:54:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenglong_li

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by gaoyang636 at 2012-04-12 16:03:57:
有一个问题你没说清楚：PCR产物回收后做模板再次进行PCR，那么这个第二轮 PCR的引物是另一套，还是相同的引物？
如果是另一套，比如内测引物，这种nested-PCR没问题，并且常常使用；
而如果是相同引物，的确不稳 ...

有道理！
回复此楼
14楼2012-04-13 13:16:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

youngker918

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以啊，把PCR产物稀释100倍，取稀释后的液体一微升作为模板加入新的PCR体系里就可以了
赞一下 回复此楼
15楼2012-04-13 18:59:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我爱沈泉

金虫 (小有名气)
可以咯。。
回复此楼
16楼2012-04-13 21:53:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

摩羯的心

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主 我现在也是在用第一轮的PCR产物作为第二轮PCR的模板，引物不同，我感觉结果也是不太稳定，刚得到的PCR产物做模板做二轮PCR的结果很好，但之后重复做就感觉不好了，很纠结呢？楼主是怎么做的呀  我打算将第一轮PCR产物连接到细胞中，提取质粒，然后做模板，进行二轮PCR  楼主支个招吧
赞一下 回复此楼
17楼2014-04-15 09:02:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

艰苦温度

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
17楼: Originally posted by 摩羯的心 at 2014-04-15 09:02:41
楼主 我现在也是在用第一轮的PCR产物作为第二轮PCR的模板，引物不同，我感觉结果也是不太稳定，刚得到的PCR产物做模板做二轮PCR的结果很好，但之后重复做就感觉不好了，很纠结呢？楼主是怎么做的呀  我打算将第一轮 ...

你第一轮做完后电泳检测了吗？还是直接进行第二轮PCR？
赞一下 回复此楼
18楼2014-04-18 17:56:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

摩羯的心

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
18楼: Originally posted by 艰苦温度 at 2014-04-18 17:56:39
你第一轮做完后电泳检测了吗？还是直接进行第二轮PCR？...

检测了 条带很亮 而且纯化后再进行的第二轮 第二轮有时候除了第二次的目的条带之外 做模板的那条带也会纯在
赞一下 回复此楼
19楼2014-04-19 10:20:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sobarrygar

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问你pcr的产物是什么？ssr还是aflp的呀，ssr感觉不行吧
赞一下 回复此楼
20楼2015-01-09 09:01:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 晓婧happy 的主题更新
201/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿9材料学硕297已过六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-04-04 12/600 2026-04-05 19:04 by 蓝云思雨
[考研] 材料与化工371求调剂 +10 陪琳看海 2026-04-04 11/550 2026-04-05 15:26 by luoyongfeng
[考研] 295求调剂 +10 xndjjj 2026-04-04 10/500 2026-04-05 11:19 by 猪会飞
[考研] 085602调剂 初试总分335 +12 19123253302 2026-04-04 12/600 2026-04-05 08:08 by 544594351
[考研] 考研调剂 +5 四川王涛 2026-04-04 5/250 2026-04-04 22:18 by 啵啵啵0119
[考研] 材料专业383求调剂 +8 郭阳阳阳成 2026-04-03 8/400 2026-04-04 10:29 by Rednal.
[考研] 297求调剂 +11 ljy20040718！ 2026-04-03 13/650 2026-04-04 09:23 by 来看流星雨10
[考研] 311求调剂 +11 勇敢的小吴 2026-04-02 11/550 2026-04-03 21:46 by qlm5820
[考研] 281求调剂 +10 aaawhy 2026-04-03 10/500 2026-04-03 21:42 by lbsjt
[考研] 数一英一285求调剂 +7 AZMK 2026-04-03 9/450 2026-04-03 13:03 by ms629
[考研] 266分，一志愿电气工程，本科材料，求材料专业调剂 +9 哇呼哼呼哼 2026-04-02 9/450 2026-04-03 12:05 by 1753564080
[基金申请] 请问共同通讯和共同一作的认可度问题 10+4 psa1234 2026-04-01 10/500 2026-04-03 11:08 by Kittylucky
[考研] 273求调剂 +20 李芷新1 2026-03-31 20/1000 2026-04-03 09:58 by linyelide
[考研] 一志愿复旦材料，英一专硕，总分357调剂 +4 1050389037 2026-04-02 5/250 2026-04-02 21:40 by dongzh2009
[考研] 0856材料与化工调剂，339 +14 10213207 2026-03-31 14/700 2026-04-02 21:01 by 1104338198
[考研] 286分调剂 +20 Faune 2026-03-30 22/1100 2026-04-02 13:24 by clyblh
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358 +3 cs0106 2026-04-02 5/250 2026-04-02 11:37 by olim
[硕博家园] 博一被送出联培感觉不适应怎么办 +3 全村的狗 2026-03-31 3/150 2026-04-01 10:44 by 328838485
[考研] 考研调剂求助 +7 13287130938 2026-03-31 7/350 2026-03-31 16:39 by 690616278
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-31 4/200 2026-03-31 10:04 by cal0306
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭