应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR产物再进行PCR
51/1返回列表
查看: 4137  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

晓婧happy

铜虫 (初入文坛)

[交流] PCR产物再进行PCR

大家有木有做过PCR回收产物为模板扩增目的基因啊？我听说是可行的，可我们老师说不稳定，很不稳定，大家给个意见吧，谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-04-12 14:47:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaoyang636

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
晓婧happy(金币+1): 谢谢参与
amisking: 金币+3, 鼓励帮助解答，欢迎继续交流。 2012-04-12 17:54:23
西瓜: 回帖置顶 2012-04-12 23:45:25
有一个问题你没说清楚：PCR产物回收后做模板再次进行PCR，那么这个第二轮 PCR的引物是另一套，还是相同的引物？
如果是另一套，比如内测引物，这种nested-PCR没问题，并且常常使用；
而如果是相同引物，的确不稳定：
产物做模板的浓度需要摸索；由于Taq酶的不保真引起的产物轻微差别也会有不利影响等等；所以说，可以考虑将回收产物转化并筛菌，拿菌液做模板，就很容易了
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2012-04-12 16:03:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

dfl204

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
晓婧happy(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+2, Good！ 2012-04-12 23:45:14
如果第一轮PCR产物量很低的话可以用来作为下一轮PCR的模板。
巢氏PCR都是经过两轮扩增的。

用高保值度的酶和较高的退火温度是可以基本保证产物的特异性的。
赞一下 回复此楼
5楼2012-04-12 16:01:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

晓婧happy

铜虫 (初入文坛)
西瓜: , 绝对可行！ 2012-04-12 23:45:48
引用回帖:
6楼: Originally posted by gaoyang636 at 2012-04-12 16:03:57:
有一个问题你没说清楚：PCR产物回收后做模板再次进行PCR，那么这个第二轮 PCR的引物是另一套，还是相同的引物？
如果是另一套，比如内测引物，这种nested-PCR没问题，并且常常使用；
而如果是相同引物，的确不稳 ...

不是相同的引物，是想从得到的基因片段上再扩增出一部分片段，这样是可行的吧？我现在也做了转化了，以后就用菌液当模板了
赞一下 回复此楼
7楼2012-04-12 16:18:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

晓婧happy

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by dfl204 at 2012-04-12 16:01:08:
如果第一轮PCR产物量很低的话可以用来作为下一轮PCR的模板。
巢氏PCR都是经过两轮扩增的。

用高保值度的酶和较高的退火温度是可以基本保证产物的特异性的。

那我是不是需要提高退火温度啊？
赞一下 回复此楼
8楼2012-04-12 16:20:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭