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夏木鲁鲁

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1楼 2016-01-13 19:36:26

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-13 22:51:07

I think you should use a positive control, such as amplification of housekeeping gene (Actin, etc.), which really does much help for troubleshooting.

Therefore, you should amplify a housekeeping gene using your DNA samples tomorrow.

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5楼2016-01-13 20:02:14

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夏木鲁鲁

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除了58c退火以外。56 59 60 都做了。效果差不多。
体系模板2ul 3ul 4ul 5ul 都做了。结果没有什么变化

3楼2016-01-13 19:45:34

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chiemo

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你怎么判定是引物二聚体的？是否因为合成的引物不纯？可以试试touchdown PCR，我之前跑出来有杂带，touchdown后就只有目标序列了

6楼2016-01-14 10:48:41

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Ciruela

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模版降解、引物不对，有可能的

7楼2016-01-14 13:25:34

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匿名

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8楼2016-01-14 13:35:14

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用actin检测模板，看模板是不是有问题。如果没有问题就降低模板的量，1-2ul，56度在试试。如果还是不行就是引物的问题

科研是条不归路！

10楼2016-01-14 14:41:36

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ss2032

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2楼: Originally posted by 夏木鲁鲁 at 2016-01-13 19:42:41
因为传图好像有限制。大家将就看(⊙o⊙)。
反应条件。预变性94c。  5min
                  变性94c。  30s
                  退火58c    30s
                  延伸72c    45s
共40个循环 ...

一般不是做30个循环么？？？

努力翻身

11楼2016-01-14 14:52:09

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夏木鲁鲁

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因为传图好像有限制。大家将就看(⊙o⊙)。
反应条件。预变性94c。  5min
                  变性94c。  30s
                  退火58c    30s
                  延伸72c    45s
共40个循环
                  最后延伸72c 10min

2楼2016-01-13 19:42:41

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没有条带的话就降温，试试56，55，54，53，52

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4楼2016-01-13 19:51:12

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可以设置阳性对照，适当降低退火温度，检查模板