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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR结果只有引物二聚体的条带，没有产物
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tingyue678

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR结果只有引物二聚体的条带，没有产物 已有5人参与

做PCR结果只有引物二聚体条带，没有产物，请教大神可能是什么原因造成的。我做的是酿酒酵母的基因组。
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1楼 2015-01-08 20:01:23
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aotoulan

禁虫 (小有名气)
★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-09 19:30:42
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2楼2015-01-08 21:26:26
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zliean

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-09 19:30:49
检查检查引物 看看pcr温度

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3楼2015-01-09 02:14:14
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-09 19:30:58
您好，很高兴
结果只有引物二聚体，但是没有产物，至少引物之间还能合成双链说明引物是没问题的，
那么原因可能有
1）模板降解了，没有模板无法合成双链 ，所以你得确定你的模板有没有降解，重新提取模板再操作一遍
2）酶的特异性太差了，室温下，酶活性未被彻底封闭，酶还是有活性的，所以指导了引物与引物结合，在温度升到95℃变性的时候，却没有引物和模板配对，也无法扩增出产物的。如果使用的是普通Taq酶的话，可能是操作上慢了些，或是没有在低温下进行操作，如果都有的话，那就是酶的性能太差，所以要找一种室温下酶活性完全封闭的酶，建议换成热启动Taq酶，我扩增结束后没有二聚体也没有非特异性产物，市场上有很多卖的，可以找点便宜的。最好找化学修饰的，封闭更彻底，而且无动物性DNA污染。
我的推荐：http://cn.promega.com（效果好，价格贵的）
http://www.detaibio.com/relia-hotstart-polymerase.html（效果也不错，价格适中）
还有TAKARA（它的网站正在改版，目前还没有信息 ）
呵呵 希望对你有所帮助哦
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
4楼2015-01-09 10:16:26
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xmclql

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-09 19:31:07
我们也是做S. cerevisiae的，类似的问题也遇到过。DNA模板质量很重要，如果可以使用kit提取纯化，PCR延伸时间可以尝试稍微放长一点。
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5楼2015-01-09 17:28:49
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曼舞流苏

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我第一反应是你PCR条件木有控制好，温度什么的不合适，这个需要多做几次摸索一下的，可以设置个温度梯度试试。。
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6楼2015-01-12 11:02:08
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15694412860

新虫 (初入文坛)
请问您怎么解决的，我也遇到了一样的问题

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powerful
7楼2017-05-12 16:40:56
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