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PCR结果只有引物二聚体的条带，没有产物 已有5人参与
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| 做PCR结果只有引物二聚体条带，没有产物，请教大神可能是什么原因造成的。我做的是酿酒酵母的基因组。 |
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2楼2015-01-08 21:26:26
3楼2015-01-09 02:14:14
18761615793
木虫 (正式写手)
小虫
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【答案】应助回帖
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您好，很高兴 结果只有引物二聚体，但是没有产物，至少引物之间还能合成双链说明引物是没问题的， 那么原因可能有 1）模板降解了，没有模板无法合成双链 ，所以你得确定你的模板有没有降解，重新提取模板再操作一遍 2）酶的特异性太差了，室温下，酶活性未被彻底封闭，酶还是有活性的，所以指导了引物与引物结合，在温度升到95℃变性的时候，却没有引物和模板配对，也无法扩增出产物的。如果使用的是普通Taq酶的话，可能是操作上慢了些，或是没有在低温下进行操作，如果都有的话，那就是酶的性能太差，所以要找一种室温下酶活性完全封闭的酶，建议换成热启动Taq酶，我扩增结束后没有二聚体也没有非特异性产物，市场上有很多卖的，可以找点便宜的。最好找化学修饰的，封闭更彻底，而且无动物性DNA污染。 我的推荐：http://cn.promega.com（效果好，价格贵的） http://www.detaibio.com/relia-hotstart-polymerase.html（效果也不错，价格适中） 还有TAKARA（它的网站正在改版，目前还没有信息 ） 呵呵 希望对你有所帮助哦 |
4楼2015-01-09 10:16:26
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