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tingyue678

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR结果只有引物二聚体的条带,没有产物 已有5人参与

做PCR结果只有引物二聚体条带,没有产物,请教大神可能是什么原因造成的。我做的是酿酒酵母的基因组。
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aotoulan

禁虫 (小有名气)


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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2015-01-09 19:30:42
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2楼2015-01-08 21:26:26
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zliean

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2015-01-09 19:30:49
检查检查引物 看看pcr温度

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2015-01-09 02:14:14
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖


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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2015-01-09 19:30:58
您好,很高兴
结果只有引物二聚体,但是没有产物,至少引物之间还能合成双链说明引物是没问题的,
那么原因可能有
1)模板降解了,没有模板无法合成双链 ,所以你得确定你的模板有没有降解,重新提取模板再操作一遍
2)酶的特异性太差了,室温下,酶活性未被彻底封闭,酶还是有活性的,所以指导了引物与引物结合,在温度升到95℃变性的时候,却没有引物和模板配对,也无法扩增出产物的。如果使用的是普通Taq酶的话,可能是操作上慢了些,或是没有在低温下进行操作,如果都有的话,那就是酶的性能太差,所以要找一种室温下酶活性完全封闭的酶,建议换成热启动Taq酶,我扩增结束后没有二聚体也没有非特异性产物,市场上有很多卖的,可以找点便宜的。最好找化学修饰的,封闭更彻底,而且无动物性DNA污染。
我的推荐:http://cn.promega.com(效果好,价格贵的)
http://www.detaibio.com/relia-hotstart-polymerase.html(效果也不错,价格适中)
还有TAKARA(它的网站正在改版,目前还没有信息 )
呵呵 希望对你有所帮助哦
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
4楼2015-01-09 10:16:26
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xmclql

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2015-01-09 19:31:07
我们也是做S. cerevisiae的,类似的问题也遇到过。DNA模板质量很重要,如果可以使用kit提取纯化,PCR延伸时间可以尝试稍微放长一点。
5楼2015-01-09 17:28:49
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曼舞流苏

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我第一反应是你PCR条件木有控制好,温度什么的不合适,这个需要多做几次摸索一下的,可以设置个温度梯度试试。。
6楼2015-01-12 11:02:08
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15694412860

新虫 (初入文坛)

请问您怎么解决的,我也遇到了一样的问题

发自小木虫IOS客户端
powerful
7楼2017-05-12 16:40:56
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