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beaubear银虫 (初入文坛)
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microRNA实时定量PCR上游引物自身形成二聚物怎么办？ 已有2人参与
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感觉自行设计PCR引物已经很难了，何况RT-PCR要求更多；但碰上设计mir的RT-PCR引物，更是难上加难。。。 先吐槽一下，然后言归正传。 根据购买的试剂盒说明设计RT-PCR上游引物，直接将成熟miRNA序列中的U转换成T，但首先Tm值不符合要求。于是对5‘端修饰，加入适当GC，调整到合适Tm。采用PrimerSelect对引物进行检测，首先发现可能形成发卡结构，于是重新调整GC顺序，直到ok。然后发现，所得引物最大的弊端是形成自身二聚体，这需要改变原miRNA序列，于是陷入混乱。。。 出现这种情况，那成熟miRNA在PCR扩增时是不是也会自身形成二聚体？结果是否可靠，是偏大还是偏小呢？  求牛人解答~  |
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