| 查看: 1592 | 回复: 6 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
beaubear银虫 (初入文坛)
|
[求助]
microRNA实时定量PCR上游引物自身形成二聚物怎么办？ 已有2人参与
|
|
|
感觉自行设计PCR引物已经很难了，何况RT-PCR要求更多；但碰上设计mir的RT-PCR引物，更是难上加难。。。 先吐槽一下，然后言归正传。 根据购买的试剂盒说明设计RT-PCR上游引物，直接将成熟miRNA序列中的U转换成T，但首先Tm值不符合要求。于是对5‘端修饰，加入适当GC，调整到合适Tm。采用PrimerSelect对引物进行检测，首先发现可能形成发卡结构，于是重新调整GC顺序，直到ok。然后发现，所得引物最大的弊端是形成自身二聚体，这需要改变原miRNA序列，于是陷入混乱。。。 出现这种情况，那成熟miRNA在PCR扩增时是不是也会自身形成二聚体？结果是否可靠，是偏大还是偏小呢？  求牛人解答~  |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有272人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PCR引物二聚体的问题
已经有9人回复
- 各位学长、学姐帮帮忙，PCR只有引物二聚体
已经有18人回复
- 最近做pcr,内参出来了，目的片段却一直出不来，只有引物二聚体
已经有14人回复
- PCR产物，只有引物二聚体，，怎么办
已经有21人回复
- 关于microRNA q RT-PCR绝对定量
已经有4人回复
- microRNA的荧光定量PCR
已经有4人回复
- 怎样消除PCR产物中的引物二聚体？
已经有3人回复
- PCR引物二聚体问题
已经有12人回复
- 定量PCR-引物二聚体问题
已经有5人回复
- 使用多对引物进行实时定量PCR后未得到实验结果，是否能说明目的基因不表达？
已经有10人回复
- pcr 引物二聚体出现是不是在酶的作用下产生的
已经有10人回复
- 求问一个问题，dNTP浓度过低是否在PCR反应中就会形成引物二聚体 谢谢
已经有5人回复
- 总dna电泳有条带，但PCR后只有引物二聚体
已经有23人回复
- PCR条带为什么会出现引物二聚体呀？目的条带没有出现。新手不大懂~~~
已经有9人回复
- 基因组中长片段PCR应该注意的几个问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】PCR引物二聚体问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】pcr反应目的条带很浅，引物二聚体很亮
已经有33人回复
- 【求助/交流】PCR只有引物二聚体，有图
已经有20人回复
- 详细图解：实时定量PCR引物和探针设计操作步骤
已经有31人回复
beaubear
银虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1381.1
- 帖子: 49
- 在线: 47.4小时
- 虫号: 1632117
- 注册: 2012-02-21
- 性别: MM
- 专业: 食品科学基础
3楼2014-08-21 17:25:30
summerliehu
银虫 (小有名气)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 231.8
- 散金: 12
- 帖子: 172
- 在线: 82.1小时
- 虫号: 1270888
- 注册: 2011-04-19
- 性别: GG
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
2楼2014-08-21 14:46:08
4楼2014-08-21 21:57:17
5楼2014-08-22 10:20:39