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韩元富豪金虫 (小有名气)
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各位学长、学姐帮帮忙，PCR只有引物二聚体 已有11人参与
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| 设计的一对引物，Tm值分别是72℃、67.2℃，尝试的温度有66℃、65℃、64℃、63℃、62℃，但都只有引物二聚体，怎么办，（先前提模板DNA时有条带，但PCR的时候就只有引物二聚体了），已经做了好长时间了，怎么办，求指点 |
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| 如果是引物合成单上的退火温度的话，根据它给的退火温度减5度左右是很难P出来的，我一般用英俊合成引物，合成单上有两个Tm值，一个大的一个小的，我的一般都是大的那个Tm值减去10度多才能跑出目的片段，不知道你的这个Tm值是怎么确定的，我估计是你P的那几个退火温度是太高了。建议以55度为中心，上下加减5度，共10个梯度，应该就能出来了 |
10楼2014-05-06 15:58:56
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