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[交流]
如何证明两蛋白是异源二聚体
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| 各位秀友，已知两个相同类型的蛋白（同一家族含相同类型结构域，转录因子）能够相互作用，也有报道说可以形成异源二聚体，请问用什么方法可以证明它们确实是以异源二聚体的形式存在呢？？求赐教，谢谢！！ |
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 蛋白质生物学实验经验 | 核酸生物学实验经验 | 细胞生物学实验经验 |
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3楼2013-03-19 08:53:39
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先用非变性凝胶电泳测定一次样品分子量，再用SDS-PAGE走一次同一种样品的电泳，后者如果出现两条不同的带，而且两条带的对应的分子量相加后等于用非变性凝胶电泳测定一次样品分子量的分子量，才可能存在：形成异源二聚体。 但是这只是说有可能，并不表示在细胞内部必定存在两个相同类型的蛋白（同一家族含相同类型结构域，转录因子）能够相互作用，也有报道说可以形成异源二聚体。首先需要做一个细胞外的异源二聚体（与电泳所用 的样品相同）的蛋白质二聚体的功能测试，如果确定有功能，至少能够到达和结合到转录因子的功能位点（与DNA特定片段或者去其他转录因子能够相互作用而促进形成转录机器）。然后最好确定一下:细胞内的能够到达和结合到转录因子的功能位点（与DNA特定片段或者去其他转录因子能够相互作用而促进形成转录机器），可以用ChIP或者GFP等。 Transcriptional factor的定义： 1.转录因子（Transcriptional factor）：真核细胞的RNA聚合酶基因转录时在启动子部位正确启动转录所需要的蛋白质分子。根据其功能可分为三类：（1）通用转录因子；（2）序列特异性转录因子；（3）其他辅助因子。参见：谭景莹、董志伟 主编，英汉生物化学与分子生物学词典，科学出版社，2000，P993. 2.transcription factor, molecule that controls the activity of a gene by determining whether the gene’s DNA (deoxyribonucleic acid) is transcribed into RNA (ribonucleic acid). The enzyme RNA polymerase catalyzes the chemical reactions that synthesize RNA, using the gene’s DNA as a template. Transcription factors control when, where, and how efficiently RNA polymerases function. http://www.britannica.com/EBchec ... ranscription-factor 3.transcription factor, a specific protein required for the initiation of transcription by an RNA polymerase. Each polymerase has its own set of transcription factors. Mosby's Medical Dictionary, 8th edition. © 2009, Elsevier. http://medical-dictionary.thefre ... anscription+factors 综上述，转录因子的现在的概念更侧重于生物功能，而不是强调其是否一定要直接地结合到特定DNA调控序列上，当然多数转录因子的确直接地结合到特定DNA调控序列上。 |
45楼2013-10-19 16:20:05
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