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zhaoxiaoming

木虫 (著名写手)

[交流] 如何证明两蛋白是异源二聚体

各位秀友，已知两个相同类型的蛋白（同一家族含相同类型结构域，转录因子）能够相互作用，也有报道说可以形成异源二聚体，请问用什么方法可以证明它们确实是以异源二聚体的形式存在呢？？求赐教，谢谢！！
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1楼 2013-03-18 22:25:08
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readytogo

荣誉版主 (文学泰斗)
★
zhaoxiaoming(金币+1): 谢谢参与
http://www.doc88.com/p-516670453151.html
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3楼2013-03-19 08:53:39
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xiaoxiang5

银虫 (正式写手)
★
zhaoxiaoming(金币+1): 谢谢参与
PAGE,SDS-PAGE
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5楼2013-03-19 18:17:37
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userhung

禁虫 (文学泰斗)
★ ★
zhaoxiaoming(金币+1): 谢谢参与
zhaoxiaoming: 金币+1, xiexie 2013-03-25 09:02:39
http://bbs.bbioo.com/thread-145685-1-1.html
http://www.patent-cn.com/C12N/CN1212017.shtml
http://bbs.bbioo.com/thread-144137-1-1.html
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10楼2013-03-19 20:14:58
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dy_414

木虫 (正式写手)
★
zhaoxiaoming(金币+1): 谢谢参与
co-IP
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21楼2013-03-19 22:21:42
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87115wh

木虫 (小有名气)
★
zhaoxiaoming(金币+1): 谢谢参与
sds 质谱
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22楼2013-03-20 10:55:38
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lace113

新虫 (初入文坛)
★
zhaoxiaoming(金币+1): 谢谢参与
怎么都没有人回答呢
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28楼2013-03-21 11:35:27
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)
★
zhaoxiaoming(金币+1): 谢谢参与
blessing
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34楼2013-03-21 13:41:40
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januaryzjr

木虫 (正式写手)
★
zhaoxiaoming(金币+1): 谢谢参与
同问
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38楼2013-03-22 07:14:48
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mzhyan

至尊木虫 (文坛精英)
★
zhaoxiaoming(金币+1): 谢谢参与
blessing
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43楼2013-03-22 08:07:08
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
★
zhaoxiaoming(金币+1): 谢谢参与
先用非变性凝胶电泳测定一次样品分子量，再用SDS-PAGE走一次同一种样品的电泳，后者如果出现两条不同的带，而且两条带的对应的分子量相加后等于用非变性凝胶电泳测定一次样品分子量的分子量，才可能存在：形成异源二聚体。

但是这只是说有可能，并不表示在细胞内部必定存在两个相同类型的蛋白（同一家族含相同类型结构域，转录因子）能够相互作用，也有报道说可以形成异源二聚体。首先需要做一个细胞外的异源二聚体（与电泳所用 的样品相同）的蛋白质二聚体的功能测试，如果确定有功能，至少能够到达和结合到转录因子的功能位点（与DNA特定片段或者去其他转录因子能够相互作用而促进形成转录机器）。然后最好确定一下:细胞内的能够到达和结合到转录因子的功能位点（与DNA特定片段或者去其他转录因子能够相互作用而促进形成转录机器），可以用ChIP或者GFP等。

Transcriptional factor的定义：
1.转录因子（Transcriptional factor）：真核细胞的RNA聚合酶基因转录时在启动子部位正确启动转录所需要的蛋白质分子。根据其功能可分为三类：（1）通用转录因子；（2）序列特异性转录因子；（3）其他辅助因子。参见：谭景莹、董志伟 主编，英汉生物化学与分子生物学词典，科学出版社，2000，P993.
2.transcription factor, molecule that controls the activity of a gene by determining whether the gene’s DNA (deoxyribonucleic acid) is transcribed into RNA (ribonucleic acid). The enzyme RNA polymerase catalyzes the chemical reactions that synthesize RNA, using the gene’s DNA as a template. Transcription factors control when, where, and how efficiently RNA polymerases function.
http://www.britannica.com/EBchec ... ranscription-factor
3.transcription factor, a specific protein required for the initiation of transcription by an RNA polymerase. Each polymerase has its own set of transcription factors.
Mosby's Medical Dictionary, 8th edition. © 2009, Elsevier.
http://medical-dictionary.thefre ... anscription+factors
综上述，转录因子的现在的概念更侧重于生物功能，而不是强调其是否一定要直接地结合到特定DNA调控序列上，当然多数转录因子的确直接地结合到特定DNA调控序列上。
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45楼2013-10-19 16:20:05
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
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45楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-10-19 16:20:05
先用非变性凝胶电泳测定一次样品分子量，再用SDS-PAGE走一次同一种样品的电泳，后者如果出现两条不同的带，而且两条带的对应的分子量相加后等于用非变性凝胶电泳测定一次样品分子量的分子量，才可能存在：形成异源二 ...

非变性凝胶电泳是不能确定分子量的
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46楼2013-10-19 19:25:30
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
引用回帖:
46楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2013-10-19 19:25:30
非变性凝胶电泳是不能确定分子量的...

是告诉你的非变性凝胶电泳是不能确定分子量的？？？！！！

请阁下去看看：[美]J.E.科林根 等 著，李慎涛 等译，精编蛋白质科学实验室南，科学出版社，2007，第307页到308页。

告诉你：：[美]J.E.科林根 等 著，李慎涛 等译，精编蛋白质科学实验室南，科学出版社，2007，第307页到308页，明确写了用非变性不连续电泳测定蛋白质的分子量的实验方案！

另外测定非公价结合的多聚体的分子量用非变性条件下的凝胶过滤层析也可以 。请见：[美]J.E.科林根 等 著，李慎涛 等译，精编蛋白质科学实验室南，科学出版社，2007，第234页到240页。
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47楼2013-10-19 22:21:07
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
引用回帖:
47楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-10-19 22:21:07
是告诉你的非变性凝胶电泳是不能确定分子量的？？？！！！

请阁下去看看：J.E.科林根 等 著，李慎涛 等译，精编蛋白质科学实验室南，科学出版社，2007，第307页到308页。

告诉你：：J.E.科林根 等 著，李慎涛 ...

两个分子量相同，等电点不同（一个是8.3，另一个是5.5），分子形状也不同（一个是球形，另一个是棒状）的蛋白质，在电泳缓冲液pH值为8.3时迁移率是否一致？
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48楼2013-10-20 05:09:12
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wizardfan2楼
2013-03-19 08:30   回复  
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xiaoyu92711楼
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yushenye12楼
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