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liuwukang

新虫 (小有名气)

[交流] PCR引物二聚体很多 已有16人参与

PCR的引物二聚体很多会不会是由于模板中的DNA浓度太低导致的?
因为我的模板浓度很低,之前排除过引物和温度设置的问题,PCR跑胶的结果中,目的条带是有的,但很暗,同时二聚体非常多很亮

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oO晶锅Oo

银虫 (初入文坛)

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-07 19:41:54
模板浓度低,扩增时大量引物无模板可贴付,可以引起引物二聚体产物的产生,建议减少引物浓度或加入DMSO或二者一起用,如果还不能解决问题,建议做巢式PCR,专门针对引物浓度不够的问题设计的PCR方法。
10楼2014-12-07 01:04:18
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普通回帖

wxk19960113

金虫 (小有名气)

★ ★
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-12-04 10:40:16
很有可能是模板浓度太低,另外镁离子浓度也会有影响,你可以设梯度看一下。

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2楼2014-12-04 02:08:16
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意萧02

木虫 (正式写手)

调整下引物用量

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3楼2014-12-04 07:12:04
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悠悠飘杨

新虫 (小有名气)

★ ★
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-12-04 10:40:19
还可以加入5%的DMSO试试,可以让引物二聚体打开
4楼2014-12-04 08:02:04
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xuyun618

禁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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5楼2014-12-05 19:16:17
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liuwukang

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by xuyun618 at 2014-12-05 19:16:17
循环数是不是也有关系

循环35个,应该这个不成问题,一直是35

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6楼2014-12-05 19:30:52
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IC夏天

新虫 (初入文坛)


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我的全是二聚体,都想shi了。老师坚决称引物没问题,各种控制变量。。好想知道有目的条带的感觉~~
7楼2014-12-05 21:51:47
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283503264

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引物问题不能排除
Action is the food and drink which will nourish my success.
8楼2014-12-06 13:50:56
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树在田野

金虫 (小有名气)


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1od引物稀释2500倍试下,引物用前用前煮沸

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好好学习
9楼2014-12-06 14:03:26
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