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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR引物二聚体很多
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liuwukang

新虫 (小有名气)

[交流] PCR引物二聚体很多 已有16人参与

PCR的引物二聚体很多会不会是由于模板中的DNA浓度太低导致的？
因为我的模板浓度很低，之前排除过引物和温度设置的问题，PCR跑胶的结果中，目的条带是有的，但很暗，同时二聚体非常多很亮

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1楼 2014-12-04 00:53:16
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oO晶锅Oo

银虫 (初入文坛)
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-07 19:41:54
模板浓度低，扩增时大量引物无模板可贴付，可以引起引物二聚体产物的产生，建议减少引物浓度或加入DMSO或二者一起用，如果还不能解决问题，建议做巢式PCR，专门针对引物浓度不够的问题设计的PCR方法。
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10楼2014-12-07 01:04:18
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wxk19960113

金虫 (小有名气)
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-12-04 10:40:16
很有可能是模板浓度太低，另外镁离子浓度也会有影响，你可以设梯度看一下。

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2楼2014-12-04 02:08:16
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意萧02

木虫 (正式写手)
调整下引物用量

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3楼2014-12-04 07:12:04
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悠悠飘杨

新虫 (小有名气)
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-12-04 10:40:19
还可以加入5%的DMSO试试，可以让引物二聚体打开
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4楼2014-12-04 08:02:04
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xuyun618

禁虫 (初入文坛)
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5楼2014-12-05 19:16:17
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liuwukang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xuyun618 at 2014-12-05 19:16:17
循环数是不是也有关系

循环35个，应该这个不成问题，一直是35

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6楼2014-12-05 19:30:52
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IC夏天

新虫 (初入文坛)
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我的全是二聚体，都想shi了。老师坚决称引物没问题，各种控制变量。。好想知道有目的条带的感觉~~
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7楼2014-12-05 21:51:47
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283503264

银虫 (小有名气)
★
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引物问题不能排除
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Action is the food and drink which will nourish my success.
8楼2014-12-06 13:50:56
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树在田野

金虫 (小有名气)
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1od引物稀释2500倍试下，引物用前用前煮沸

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好好学习
9楼2014-12-06 14:03:26
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