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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR引物二聚体很多
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虫儿飞不飞

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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6楼: Originally posted by liuwukang at 2014-12-05 19:30:52
循环35个，应该这个不成问题，一直是35
...

我都是30个循环的，为什么那么多？ 引物浓度有关系，把目的条带变亮，有引物二聚体也没事
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朝闻道，吃酸粥
11楼2014-12-07 09:27:44
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liuwukang

新虫 (小有名气)
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10楼: Originally posted by oO晶锅Oo at 2014-12-07 01:04:18
模板浓度低，扩增时大量引物无模板可贴付，可以引起引物二聚体产物的产生，建议减少引物浓度或加入DMSO或二者一起用，如果还不能解决问题，建议做巢式PCR，专门针对引物浓度不够的问题设计的PCR方法。

现在模板浓度问题已经解决，也尝试了减少引物的使用量，但仍然没什么改善

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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12楼2014-12-07 12:21:40
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jcj723

木虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你可以试一下换个酶，我之前也是这样，换成TAKARA的PrimeSTAR酶后就好了，没有引物二聚体，目的条带很亮

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13楼2014-12-07 12:47:08
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oO晶锅Oo

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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10楼: Originally posted by oO晶锅Oo at 2014-12-07 01:04:18
模板浓度低，扩增时大量引物无模板可贴付，可以引起引物二聚体产物的产生，建议减少引物浓度或加入DMSO或二者一起用，如果还不能解决问题，建议做巢式PCR，专门针对引物浓度不够的问题设计的PCR方法。

抱歉，最后一句打错一个字，应该是：专门针对底物（也就是模板）浓度不够的问题设计的PCR方法。
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14楼2014-12-07 23:56:21
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oO晶锅Oo

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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10楼: Originally posted by oO晶锅Oo at 2014-12-07 01:04:18
模板浓度低，扩增时大量引物无模板可贴付，可以引起引物二聚体产物的产生，建议减少引物浓度或加入DMSO或二者一起用，如果还不能解决问题，建议做巢式PCR，专门针对引物浓度不够的问题设计的PCR方法。

抱歉打错字了，应该是：巢式PCR是专门针对底物（也就是模板）浓度不够的问题设计的PCR方法。
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15楼2014-12-07 23:58:27
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da芋头问

木虫 (正式写手)
啦啦啦啦啦(≧▽≦)

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16楼2014-12-08 07:02:25
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小木sigh

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主可以换一种酶试试，特异性强些，我们实验室用的诺唯赞的酶，跑PCR效果很好，目的条带很亮。
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17楼2014-12-10 14:11:36
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曼舞流苏

新虫 (小有名气)
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9楼: Originally posted by 树在田野 at 2014-12-06 14:03:26
1od引物稀释2500倍试下，引物用前用前煮沸

你的方法我试了  但是效果不大好。
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18楼2015-03-09 15:59:28
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树在田野

金虫 (小有名气)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
18楼: Originally posted by 曼舞流苏 at 2015-03-09 15:59:28
你的方法我试了  但是效果不大好。...

还能看到引物二聚体么，能p出来么

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好好学习
19楼2015-03-10 12:31:19
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古月问你哦

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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7楼: Originally posted by IC夏天 at 2014-12-05 21:51:47
我的全是二聚体，都想shi了。老师坚决称引物没问题，各种控制变量。。好想知道有目的条带的感觉~~

哈哈哈哈，我们是只要出现问题就换酶，热启动酶，长扩增高保真酶，超保真酶，肯定能成功，因为我们相信我们的引物模板是好的
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我就是我，是不一样的烟火
20楼2015-03-10 17:19:55
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