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虫儿飞不飞

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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6楼: Originally posted by liuwukang at 2014-12-05 19:30:52
循环35个,应该这个不成问题,一直是35
...

我都是30个循环的,为什么那么多? 引物浓度有关系,把目的条带变亮,有引物二聚体也没事
朝闻道,吃酸粥
11楼2014-12-07 09:27:44
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liuwukang

新虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by oO晶锅Oo at 2014-12-07 01:04:18
模板浓度低,扩增时大量引物无模板可贴付,可以引起引物二聚体产物的产生,建议减少引物浓度或加入DMSO或二者一起用,如果还不能解决问题,建议做巢式PCR,专门针对引物浓度不够的问题设计的PCR方法。

现在模板浓度问题已经解决,也尝试了减少引物的使用量,但仍然没什么改善

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
12楼2014-12-07 12:21:40
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jcj723

木虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你可以试一下换个酶,我之前也是这样,换成TAKARA的PrimeSTAR酶后就好了,没有引物二聚体,目的条带很亮

[ 发自小木虫客户端 ]
13楼2014-12-07 12:47:08
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oO晶锅Oo

银虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by oO晶锅Oo at 2014-12-07 01:04:18
模板浓度低,扩增时大量引物无模板可贴付,可以引起引物二聚体产物的产生,建议减少引物浓度或加入DMSO或二者一起用,如果还不能解决问题,建议做巢式PCR,专门针对引物浓度不够的问题设计的PCR方法。

抱歉,最后一句打错一个字,应该是:专门针对底物(也就是模板)浓度不够的问题设计的PCR方法。
14楼2014-12-07 23:56:21
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oO晶锅Oo

银虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by oO晶锅Oo at 2014-12-07 01:04:18
模板浓度低,扩增时大量引物无模板可贴付,可以引起引物二聚体产物的产生,建议减少引物浓度或加入DMSO或二者一起用,如果还不能解决问题,建议做巢式PCR,专门针对引物浓度不够的问题设计的PCR方法。

抱歉打错字了,应该是:巢式PCR是专门针对底物(也就是模板)浓度不够的问题设计的PCR方法。
15楼2014-12-07 23:58:27
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da芋头问

木虫 (正式写手)

啦啦啦啦啦(≧▽≦)

[ 发自小木虫客户端 ]
16楼2014-12-08 07:02:25
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小木sigh

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主可以换一种酶试试,特异性强些,我们实验室用的诺唯赞的酶,跑PCR效果很好,目的条带很亮。
17楼2014-12-10 14:11:36
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曼舞流苏

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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9楼: Originally posted by 树在田野 at 2014-12-06 14:03:26
1od引物稀释2500倍试下,引物用前用前煮沸

你的方法我试了  但是效果不大好。
18楼2015-03-09 15:59:28
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树在田野

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
18楼: Originally posted by 曼舞流苏 at 2015-03-09 15:59:28
你的方法我试了  但是效果不大好。...

还能看到引物二聚体么,能p出来么

[ 发自小木虫客户端 ]
好好学习
19楼2015-03-10 12:31:19
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古月问你哦

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by IC夏天 at 2014-12-05 21:51:47
我的全是二聚体,都想shi了。老师坚决称引物没问题,各种控制变量。。好想知道有目的条带的感觉~~

哈哈哈哈,我们是只要出现问题就换酶,热启动酶长扩增高保真酶超保真酶,肯定能成功,因为我们相信我们的引物模板是好的
我就是我,是不一样的烟火
20楼2015-03-10 17:19:55
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