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liuwukang

新虫 (小有名气)

[交流] PCR引物二聚体很多已有16人参与

PCR的引物二聚体很多会不会是由于模板中的DNA浓度太低导致的?
因为我的模板浓度很低,之前排除过引物和温度设置的问题,PCR跑胶的结果中,目的条带是有的,但很暗,同时二聚体非常多很亮

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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oO晶锅Oo

银虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by oO晶锅Oo at 2014-12-07 01:04:18
模板浓度低,扩增时大量引物无模板可贴付,可以引起引物二聚体产物的产生,建议减少引物浓度或加入DMSO或二者一起用,如果还不能解决问题,建议做巢式PCR,专门针对引物浓度不够的问题设计的PCR方法。

抱歉,最后一句打错一个字,应该是:专门针对底物(也就是模板)浓度不够的问题设计的PCR方法。
14楼2014-12-07 23:56:21
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wxk19960113

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-12-04 10:40:16
很有可能是模板浓度太低,另外镁离子浓度也会有影响,你可以设梯度看一下。

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-12-04 02:08:16
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意萧02

木虫 (正式写手)

调整下引物用量

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-12-04 07:12:04
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悠悠飘杨

新虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-12-04 10:40:19
还可以加入5%的DMSO试试,可以让引物二聚体打开
4楼2014-12-04 08:02:04
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