| 查看: 897 | 回复: 2 | ||
lingling1988铜虫 (初入文坛)
|
[求助]
小目的片段的测序及设计引物的疑问
|
| 我要对回收到的一些目的片段进行测序，目前出现的问题：一，这些目的片段中有的本来应该在800-1000bp之间不等，可是再用相应的引物并以它们为模板做PCR，在琼脂糖凝胶上检测的结果却只有250-500bp之间；其二，就是有些片段本身很小，100-500bp，PCR检测的结果也与其对应，但是我的疑问是对于这么小的目的片段，想拿去测序的话，在连接、转化、质粒检测等方面应该注意哪些细节，以及在设计引物时要注意什么问题？ |
回复此楼» 猜你喜欢
Materials Today Chemistry审稿周期
已经有4人回复
-
萌生出自己或许不适合搞科研的想法，现在跑or等等看？
已经有3人回复
-
参与限项
已经有3人回复
-
假如你的研究生提出不合理要求
已经有7人回复
-
实验室接单子
已经有4人回复
-
全日制（定向）博士
已经有4人回复
-
对氯苯硼酸纯化
已经有3人回复
-
求助:我三月中下旬出站，青基依托单位怎么办？
已经有12人回复
-
所感
已经有4人回复
-
要不要辞职读博？
已经有7人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 有关植物基因条形码及相关的引物设计问题
已经有7人回复
- 关于基因测序引物的设计
已经有7人回复
- 基因的下半部分已经测序完成，引物设计了两次上半部分总是扩不出来是什么原因？
已经有11人回复
- 如何设计引物扩增片段？做克隆的
已经有11人回复
- 测序结果分析，以及RACE引物设计。求助呢
已经有3人回复
- 引物设计区域选择问题
已经有7人回复
- 引物设计3‘端最后一个碱基的讨论
已经有13人回复
- 测序结果只能找到上游引物，没有下游引物是怎么回事啊
已经有14人回复
- 大片段DNA测序的问题
已经有7人回复
- 通用引物需要自己设计吗？
已经有6人回复
- 大片段连接问题
已经有20人回复
- 嵌套PCR引物如何设计？目的片段434bp
已经有6人回复
- 求助：PCR扩增片段测序结果引物中间多出150bp的片段
已经有5人回复
- 带信号肽的长片段引物设计
已经有15人回复
- 引物设计的问题
已经有13人回复
- 测序结果发现，在引物位置多了一位碱基，是什么原因引起的？
已经有16人回复
- PCR引物设计的问题
已经有8人回复
- 【求助/交流】现要设计引物扩增后测序，无各个条件都满足的引物，请问什么条件是最重�
已经有5人回复
- 【求助/交流】设计的引物在NCBI blast中比对居然没有我的目的片段
已经有5人回复
- 【求助/交流】引物设计信息如此，touchdownPCR如何设计？
已经有7人回复
- 【求助/交流】怎样在一段序列中查找可能的测序引物？
已经有4人回复
- 克隆基因全长引物设计问题
已经有32人回复
Sthunder
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 3
- 应助: 130 (高中生)
- 金币: 2337.8
- 散金: 15
- 红花: 9
- 帖子: 308
- 在线: 176.6小时
- 虫号: 2551016
- 注册: 2013-07-17
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lingling1988(wizardfan代发): 金币+4, 谢谢分享经验 2013-09-17 06:30:33
感谢参与，应助指数 +1
lingling1988(wizardfan代发): 金币+4, 谢谢分享经验 2013-09-17 06:30:33
| 其他的应该没有太大问题，按一般情况做就好，就是小片段跑胶的时候需要浓度高点的胶，不然和你引物二聚体分不开。我要说的是连接问题，个人觉得300bp以上的连接都没问题，但100bp的话有点小，连接的时候可以适当延长时间，如果T-A连接可能还好，但如果是酶切后连接可以在连接前将载体和PCR产物在65°加热5 min，然后再连接！Good luck！ |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
lingling1988
2楼2013-09-13 22:20:37
lingling1988
铜虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 158
- 红花: 1
- 帖子: 38
- 在线: 23.4小时
- 虫号: 2443661
- 注册: 2013-05-01
- 性别: MM
- 专业: 植物病理学
3楼2013-09-13 22:52:15