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带信号肽的长片段引物设计
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我需要表达一些分泌的跨膜蛋白，但是表达载体没有分泌信号肽，所以需要人工PCR在序列前段添加信号肽。 现在引物长度大致为20bp片段+60bp信号肽+9bp酶切位点及保护碱基。 现在引物设计长度较长，请问谁有过相关方面的经验可以分享吗？ |
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真巧，我也刚解决完一个跟这个一模一样的问题。 做两次PCR，一共设计3条引物。两条5‘的，一条包含部分信号肽序列和部分目的基因片段，用它和3’引物做第一次PCR，取1μl pcr产物用做二次PCR的模板。第二条5‘引物包含部分与第一条5'引物序列和余下的信号肽及酶切位点保护碱基等，PCR,，回收，OK! 另，由于设计两次PCR，出错的可能性升高，测序时可以多测几个，3or4个！ 我就是这样做的，没问题！ |
3楼2012-03-07 11:16:29
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