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clbb1030

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[交流] 【求助/交流】PCR片段大小问题已有5人参与

我从动物组织中分离纯化得到天然蛋白是233个氨基酸，然后在NCBI上找到它的序列，按照NCBI上提供的DNA序列设计引物，加限制性酶切位点。Total RNA为模板RT-PCR得到的片段约1500bp，我想知道这个RT-PCR产物是我想要的吗？理论上讲233个氨基酸对应的DNA应该是700左右。为什么大小差这么多呢？

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1楼2010-08-18 16:08:31

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sqhnsd

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引用回帖:

Originally posted by clbb1030 at 2010-08-18 16:08:31:
我从动物组织中分离纯化得到天然蛋白是233个氨基酸，然后在NCBI上找到它的序列，按照NCBI上提供的DNA序列设计引物，加限制性酶切位点。Total RNA为模板RT-PCR得到的片段约1500bp，我想知道这个RT-PCR产物是我想要 ...

应该不对，可能不是特异性扩增。你可以考虑重新设计一个引物。

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2楼2010-08-18 16:21:27

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三磷酸腺苷

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amisking(金币+2): 2010-08-18 22:06:12

233 AAs
假设没有任何信号肽或者其他翻译后剪切等，那么应该对应699个碱基编码，但是mRNA上面是会带有UTR区域，DNA序列的话还得加上内含子

我想这个东西应该就是UTR区域了，你看看NCBI的注释，会写哪里是UTR，你算算看对不对。另外既然都克隆出来了，就表达一下看看然后做WB鉴定下是不是

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3楼2010-08-18 16:22:19

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